作者cmublue (BLUE)
看板Biotech
標題[求救] RT-PCR的一些小細節
時間Sun Oct 17 15:42:14 2010
最近在做RT-PCR想看sample間基因大概的表現量差異
我第一次PCR是做26cycles
老闆說cycle太高了會看不出差異 所以我又降為24cycles
之後拿去跑膠 我用小comb去跑 sample:dye 1:5 (合計6ul)
感覺似乎太多了 都會滿出loading site (不知道這樣會不會影響到裡面DNA的量)
前面是一些雜言
我想問的是
該注意哪些小地方 才能清楚的看清sample間的差異
例如sample跟dye的比例該怎麼調整 and EtBr的作用時間長短該多少
(抱歉敘述能力不好 希望有大大看得懂我的問題 感謝)
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.246
1F：→ gryou:為何不用qPCR來定量？ 10/17 17:52
2F：推 cbeta:跑qPCR就可以了啊～ 10/17 20:34
3F：推 captdavince:這種好像跑qPCR的data才能夠人家相信..話說回來.印象 10/17 23:06
4F：→ captdavince:中純粹RT-PCR看差異..你可能要先抓還在log期的cycle 10/17 23:07
5F：→ captdavince:畢竟一到plateau期..你看的東西就不準了 10/17 23:07
6F：→ captdavince:sample跟dye的比例不是直接看你的dye是幾倍的就照倍數 10/17 23:07
7F：→ captdavince:跟sample混就好? 10/17 23:08
8F：→ chaunen:try 不同cycle數 18 20 22 24 之類的... 10/17 23:55
9F：推 mattmatt:google: semi quantitative (RT)-pcr 或 半定量 10/18 01:26
10F：→ Ianthegood:qPCR啦 RT不好做quantitative 10/18 07:57
11F：推 yawai:如果dye是6x 應該是sample:dye = 5:1 吧 10/18 09:12
12F：推 Ianthegood:dye不會影響EtBr後的亮度 只是讓它不要飄 多一點無妨 10/18 10:48
13F：推 sunday30430:我跑30個CYCLE耶! 10/19 22:13