作者cmublue (BLUE)
看板Biotech
标题[求救] RT-PCR的一些小细节
时间Sun Oct 17 15:42:14 2010
最近在做RT-PCR想看sample间基因大概的表现量差异
我第一次PCR是做26cycles
老板说cycle太高了会看不出差异 所以我又降为24cycles
之後拿去跑胶 我用小comb去跑 sample:dye 1:5 (合计6ul)
感觉似乎太多了 都会满出loading site (不知道这样会不会影响到里面DNA的量)
前面是一些杂言
我想问的是
该注意哪些小地方 才能清楚的看清sample间的差异
例如sample跟dye的比例该怎麽调整 and EtBr的作用时间长短该多少
(抱歉叙述能力不好 希望有大大看得懂我的问题 感谢)
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.246
1F：→ gryou:为何不用qPCR来定量？ 10/17 17:52
2F：推 cbeta:跑qPCR就可以了啊～ 10/17 20:34
3F：推 captdavince:这种好像跑qPCR的data才能够人家相信..话说回来.印象 10/17 23:06
4F：→ captdavince:中纯粹RT-PCR看差异..你可能要先抓还在log期的cycle 10/17 23:07
5F：→ captdavince:毕竟一到plateau期..你看的东西就不准了 10/17 23:07
6F：→ captdavince:sample跟dye的比例不是直接看你的dye是几倍的就照倍数 10/17 23:07
7F：→ captdavince:跟sample混就好? 10/17 23:08
8F：→ chaunen:try 不同cycle数 18 20 22 24 之类的... 10/17 23:55
9F：推 mattmatt:google: semi quantitative (RT)-pcr 或 半定量 10/18 01:26
10F：→ Ianthegood:qPCR啦 RT不好做quantitative 10/18 07:57
11F：推 yawai:如果dye是6x 应该是sample:dye = 5:1 吧 10/18 09:12
12F：推 Ianthegood:dye不会影响EtBr後的亮度 只是让它不要飘 多一点无妨 10/18 10:48
13F：推 sunday30430:我跑30个CYCLE耶! 10/19 22:13