作者fc01 ()
看板Biotech
標題[求救]鬼打牆PCR完全作不出來
時間Wed Oct 13 07:59:16 2010
本來我的PCR條件都還算穩,
因為要離職了,所以最近一直在趕著補DATA
結果上上星期實驗室4度冰箱突然壞掉,
我趕快把放裡面的DNA,和一些藥(鎂離子溶液,buffer...)
救到-20度冰箱(4度冰箱溫度升到18度,東西約在裡面放了1小時)
然後之後PCR就完全做不出來了
情況有兩種,有時是什麼東西都做不出來
有時是做出不是我要的東西(目標產物200bp,跑出300和400bp的band各一條)
不同組primer都出現類似情況
我以為是有藥壞掉,所以能換的東西都換了
從dNTP,水,buffer,taq,
primer也買了新的
只差樣品沒辦法換新的
但是我有試過拿之前留在-20度冰箱的備用樣品來做,結果還是一樣
會出現這類狀況是為何?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.169.214.230
※ 編輯: fc01 來自: 118.169.214.230 (10/13 08:05)
1F：推 yaliu:會不會其實之前成功的data是假象？？ 10/13 08:22
2F：→ yaliu:但你的PCR結果又不是很穩定，要嘛都沒有，怎麼會時有時無? 10/13 08:23
3F：→ fc01:12組primer,各做600多個樣品,是假像我就認了 10/13 08:36
4F：→ fc01:我是有懷疑壞的是PCR機,可是其他人用是好的 10/13 08:40
5F：→ rpr:每次都有做negative control看看嗎? 10/13 09:07
6F：→ fc01:有,很乾淨該沒東西就沒東西 10/13 09:10
7F：推 jennychine:去拜拜......... 10/13 09:29
8F：推 yaliu:曾經遇過PCR機器有問題的～因為用別台P出來的結果都很穩定 10/13 18:06
9F：→ yaliu:因為那台PCR機器，就連最好P的質體的M13F/R都時有時無 10/13 18:07
10F：→ yaliu:然後阿～我對自己的PCR技術很有信心～所以是機器溫度怪怪的 10/13 18:08
11F：→ yaliu:看你要不要換台機器看看啦 10/13 18:08
12F：推 Fourfish:PCR機器有問題..... 10/14 21:20
13F：推 SureWinmouse:PCR說簡單 但有時候做不出來就是做不出來... 10/15 14:39