作者fc01 ()
看板Biotech
标题[求救]鬼打墙PCR完全作不出来
时间Wed Oct 13 07:59:16 2010
本来我的PCR条件都还算稳,
因为要离职了,所以最近一直在赶着补DATA
结果上上星期实验室4度冰箱突然坏掉,
我赶快把放里面的DNA,和一些药(镁离子溶液,buffer...)
救到-20度冰箱(4度冰箱温度升到18度,东西约在里面放了1小时)
然後之後PCR就完全做不出来了
情况有两种,有时是什麽东西都做不出来
有时是做出不是我要的东西(目标产物200bp,跑出300和400bp的band各一条)
不同组primer都出现类似情况
我以为是有药坏掉,所以能换的东西都换了
从dNTP,水,buffer,taq,
primer也买了新的
只差样品没办法换新的
但是我有试过拿之前留在-20度冰箱的备用样品来做,结果还是一样
会出现这类状况是为何?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.169.214.230
※ 编辑: fc01 来自: 118.169.214.230 (10/13 08:05)
1F：推 yaliu:会不会其实之前成功的data是假象？？ 10/13 08:22
2F：→ yaliu:但你的PCR结果又不是很稳定，要嘛都没有，怎麽会时有时无? 10/13 08:23
3F：→ fc01:12组primer,各做600多个样品,是假像我就认了 10/13 08:36
4F：→ fc01:我是有怀疑坏的是PCR机,可是其他人用是好的 10/13 08:40
5F：→ rpr:每次都有做negative control看看吗? 10/13 09:07
6F：→ fc01:有,很乾净该没东西就没东西 10/13 09:10
7F：推 jennychine:去拜拜......... 10/13 09:29
8F：推 yaliu:曾经遇过PCR机器有问题的～因为用别台P出来的结果都很稳定 10/13 18:06
9F：→ yaliu:因为那台PCR机器，就连最好P的质体的M13F/R都时有时无 10/13 18:07
10F：→ yaliu:然後阿～我对自己的PCR技术很有信心～所以是机器温度怪怪的 10/13 18:08
11F：→ yaliu:看你要不要换台机器看看啦 10/13 18:08
12F：推 Fourfish:PCR机器有问题..... 10/14 21:20
13F：推 SureWinmouse:PCR说简单 但有时候做不出来就是做不出来... 10/15 14:39