最近剛剛接觸二維電泳 目前使用的是GE IPGphore3的機器 有些實驗操作的地方想請問各位 1.我在配置equlibration buffer的時候所使用的配方如下: Urea 72.07 g 6 M 1.5 M Tris-HCl, pH 8.8 6.67 ml 50 mM Glycerol 60 ml 30 % ddH2O 補到200 ml SDS (FW 288.38) 4 g 2 % 但是配完後(常溫)拿去4度中冰起來 隔天發現底下會有一團白色黏稠物沉澱 可是前人留下來的buffer卻非常清澈(也是4度保存) 這是為什麼呢? 2.在進行IEF電泳時我應該如何調整電泳的program呢? 我目前在作的是將老鼠的血液抽出後 至於4度中凝集 於離心後抽取血清 將sample與rehydration buffer混合後進行passive rehydration 之後再進行IEF 那我應該如何調整program呢? 裡面寫的gradient與另外一個固定電壓的 又該用在哪個步驟上? 3.跑完IEF後會在STRIP上發現有微微的焦痕 向別的實驗室請益後得知 可以在電極的地方墊上濾紙 可是這樣濾紙要先吸收SAMPLE還是rehydration buffer? 如果要更換濾紙那不是就會讓礦物油沾到電極? 請問板上的各位以上的問題我該如何改進呢? 謝謝 --

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