最近刚刚接触二维电泳 目前使用的是GE IPGphore3的机器 有些实验操作的地方想请问各位 1.我在配置equlibration buffer的时候所使用的配方如下: Urea 72.07 g 6 M 1.5 M Tris-HCl, pH 8.8 6.67 ml 50 mM Glycerol 60 ml 30 % ddH2O 补到200 ml SDS (FW 288.38) 4 g 2 % 但是配完後(常温)拿去4度中冰起来 隔天发现底下会有一团白色黏稠物沉淀 可是前人留下来的buffer却非常清澈(也是4度保存) 这是为什麽呢? 2.在进行IEF电泳时我应该如何调整电泳的program呢? 我目前在作的是将老鼠的血液抽出後 至於4度中凝集 於离心後抽取血清 将sample与rehydration buffer混合後进行passive rehydration 之後再进行IEF 那我应该如何调整program呢? 里面写的gradient与另外一个固定电压的 又该用在哪个步骤上? 3.跑完IEF後会在STRIP上发现有微微的焦痕 向别的实验室请益後得知 可以在电极的地方垫上滤纸 可是这样滤纸要先吸收SAMPLE还是rehydration buffer? 如果要更换滤纸那不是就会让矿物油沾到电极? 请问板上的各位以上的问题我该如何改进呢? 谢谢 --

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