作者peterjfs (幾家歡樂幾家愁)
看板Biotech
標題[求救] 如何證明某A蛋白能直接活化某B蛋白
時間Tue Oct 12 01:24:10 2010
Meeting的時候老師丟了一個問題給我
在訊息傳遞中假設 A → B → C
首先我利用了 B 的siRMA konck down B了~
可以發現 C 的磷酸化已經受影響了
然後我說 B 會去影響 C
可是老闆說要我證明 B 會去直接活化 C
然後我就跟他說做IP嗎??
他就說不是 ...叫我回家查方法
請問各位大大是要如何證明 B 會直接活化 C 呢?
他說你用 B 的siRNA 抑制會影響 C 沒錯 ......
但中間搞不好還有個 D 參與阿 A → B → D → C (這樣)
所以要我直接證明 B 活化 C
>"<....
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.252.87
1F：推 tsubasawolfy:1.OE B看c-p增加 2.in vitro kinase assay 10/12 08:52
2F：→ tsubasawolfy:3. IP我覺得也沒錯阿 前提是complex剛好被你抓下來 10/12 08:53
3F：推 williamyang:推樓上的in vitro kinase assay. 10/12 09:01
4F：→ celestial318:我覺得以上都可行= = 10/12 13:44
5F：→ saviora:如果B只是個adaptor protein IP還是沒辦法直區別B C的關係 10/12 15:53
6F：→ saviora:in vitro kinase assay比較能直接證明BC的關係 10/12 15:54
7F：→ gryou:推 in vitro kinase assay 10/13 01:42
8F：推 tsubasawolfy:in vitro kinase assay後面還有combo拳... 10/13 09:52
9F：→ tsubasawolfy:Boss:你這是試管內反應 濃度調高一點半塞變硬塞 10/13 09:53
10F：→ tsubasawolfy:你要如何證明細胞內也是同樣的反應呢? 10/13 09:53
11F：→ tsubasawolfy:反正KO and OE->in vitro assay->in vivo IP or mut 10/13 09:55
12F：→ tsubasawolfy:幾乎快變SOP.. 10/13 09:55
13F：→ tsubasawolfy:或者去做oe bc的FRET (然後又被reviewer挑毛病 endo 10/13 10:05
14F：→ tsubasawolfy:的在那？ Zzzzz 10/13 10:05