作者peterjfs (几家欢乐几家愁)
看板Biotech
标题[求救] 如何证明某A蛋白能直接活化某B蛋白
时间Tue Oct 12 01:24:10 2010
Meeting的时候老师丢了一个问题给我
在讯息传递中假设 A → B → C
首先我利用了 B 的siRMA konck down B了~
可以发现 C 的磷酸化已经受影响了
然後我说 B 会去影响 C
可是老板说要我证明 B 会去直接活化 C
然後我就跟他说做IP吗??
他就说不是 ...叫我回家查方法
请问各位大大是要如何证明 B 会直接活化 C 呢?
他说你用 B 的siRNA 抑制会影响 C 没错 ......
但中间搞不好还有个 D 参与阿 A → B → D → C (这样)
所以要我直接证明 B 活化 C
>"<....
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.62.252.87
1F：推 tsubasawolfy:1.OE B看c-p增加 2.in vitro kinase assay 10/12 08:52
2F：→ tsubasawolfy:3. IP我觉得也没错阿 前提是complex刚好被你抓下来 10/12 08:53
3F：推 williamyang:推楼上的in vitro kinase assay. 10/12 09:01
4F：→ celestial318:我觉得以上都可行= = 10/12 13:44
5F：→ saviora:如果B只是个adaptor protein IP还是没办法直区别B C的关系 10/12 15:53
6F：→ saviora:in vitro kinase assay比较能直接证明BC的关系 10/12 15:54
7F：→ gryou:推 in vitro kinase assay 10/13 01:42
8F：推 tsubasawolfy:in vitro kinase assay後面还有combo拳... 10/13 09:52
9F：→ tsubasawolfy:Boss:你这是试管内反应 浓度调高一点半塞变硬塞 10/13 09:53
10F：→ tsubasawolfy:你要如何证明细胞内也是同样的反应呢? 10/13 09:53
11F：→ tsubasawolfy:反正KO and OE->in vitro assay->in vivo IP or mut 10/13 09:55
12F：→ tsubasawolfy:几乎快变SOP.. 10/13 09:55
13F：→ tsubasawolfy:或者去做oe bc的FRET (然後又被reviewer挑毛病 endo 10/13 10:05
14F：→ tsubasawolfy:的在那？ Zzzzz 10/13 10:05