作者FENOR (FENOR)
看板Biotech
標題[求救] DMSO對於細菌的傷害程度
時間Mon Oct 11 10:41:02 2010
小弟我在mutagenesis的過程中加入了DMSO(因為太過GC-rich)
然後在PCR跑完之後就直接拿去transform，
(transform:1. mix on ice 20min
2. heat shock 90sec
3. recover with LB 40 min)
然後過了大約十六小時後長出了兩顆colony
但是抽出來測濃度的時候卻顯示我沒有抽出任何東西!
那兩顆很可能好死不死是抗kanamycin的雜菌......
我想請問一下，再加入了DMSO的情況下，
PCR跑完之後是不是去做clean up會比較好?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.84
1F：→ tsubasawolfy:哪一牌的kit跟comptent cell? 10/11 11:42
2F：→ FENOR:quickchange DH5a 10/11 12:58
3F：推 tsubasawolfy:quickchange的quick soultion我覺得就是dmso..特性一 10/11 13:11
4F：→ tsubasawolfy:樣．．另外照他標準的protocl取那2ul不足以影響到 10/11 13:11
5F：→ tsubasawolfy:ecoli的生長 而且你也欠缺tramsform的positive contr 10/11 13:12
6F：→ tsubasawolfy:ol (DH5A會不會把linear form DNA 接成plasmid ??) 10/11 13:13
7F：→ blence:DH5a是可以把nick接起來,但原po應該先跑膠確認產物再transf 10/11 14:44