作者vbhero (GOD)
看板Biotech
標題[求救] DNA電泳
時間Fri Oct 1 11:04:30 2010
最近在跑DNA電泳時出現了一些問題
1.同時做出來的膠片，有些跑完電泳後(20~25mins)，大約在500bp會出現凹陷
沒錯，肉眼觀察就可以看到的凹陷，拿去照膠，果然500bp以下的DNA都不見了
有人說這是膠沒有均勻，或是沒有全溶的結果，可是我都有用stir去轉
也都會確認有沒有剩下沒溶的gel。
請問，有什麼原因會造成這情形？
2.DNA片段大小與marker對不起來
比如說我的基因大小1695bp，跟100bp marker比對卻是在1200bp的位置
後來發現，我用另一罐loading dye就正常了！
loading dye一片膠都是用同一管，照理來說相同大小會跑在相同位置
各位有任何線索嗎？我不懂為什麼會這樣。
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◆ From: 140.121.200.179
1F：推 shines:你用多少伏特去跑? 電壓太高有時候膠會溶解 10/01 11:21
2F：→ vbhero:sorry 忘了說是用100volt跑的 0.8%gel，以前跑都沒問題 10/01 11:26
3F：→ vbhero:一直到最近才出現膠跑一跑溶掉的情況，溶掉的形狀是一條上 10/01 11:27
4F：→ vbhero:下曲折的線 10/01 11:27
5F：推 iceking:八成是buffer的問題,重配吧! 10/01 11:34
6F：推 ranilla:推樓上，上次我也泡錯，TRIS和EDTA都弄錯， 膠也溶了 10/01 12:23
7F：→ vbhero:Tris 108g 10/01 12:43
8F：→ vbhero:boric acid 55g 10/01 12:44
9F：→ vbhero:EDTA(0.5M pH8.0) 40ml 10/01 12:44
10F：→ vbhero:add H2O to 2L 5Xbuffer 10/01 12:45
11F：→ vbhero:弄錯是怎麼個弄錯法，我應該不會加錯吧 阿阿阿阿 10/01 12:47
12F：推 iceking:固定電壓,若buffer離子濃度改變,造成電阻變小,電流會變強 10/01 16:05
13F：→ iceking:導致過熱,膠就熔了. 會造成離子改變的原因只有兩個, 10/01 16:06
14F：→ iceking:1是配錯溶液,2是溶液用太久,濃度已改變. 10/01 16:06
15F：→ iceking:我說的溶液用太久,是說tank裡的TBE都沒換,卻跑了很多片膠 10/01 16:16
16F：→ vbhero:我懂，V=IR P=IV 電流上升，功率增加，產熱也增加 10/01 18:01
17F：→ vbhero:這樣的話我是不是可以配成0.4X TBE 試試？ 10/01 18:06
18F：→ gryou:500bp 可以用TAE Buffer吧 離子濃度比較低！ 10/01 19:56