作者vbhero (GOD)
看板Biotech
标题[求救] DNA电泳
时间Fri Oct 1 11:04:30 2010
最近在跑DNA电泳时出现了一些问题
1.同时做出来的胶片，有些跑完电泳後(20~25mins)，大约在500bp会出现凹陷
没错，肉眼观察就可以看到的凹陷，拿去照胶，果然500bp以下的DNA都不见了
有人说这是胶没有均匀，或是没有全溶的结果，可是我都有用stir去转
也都会确认有没有剩下没溶的gel。
请问，有什麽原因会造成这情形？
2.DNA片段大小与marker对不起来
比如说我的基因大小1695bp，跟100bp marker比对却是在1200bp的位置
後来发现，我用另一罐loading dye就正常了！
loading dye一片胶都是用同一管，照理来说相同大小会跑在相同位置
各位有任何线索吗？我不懂为什麽会这样。
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.121.200.179
1F：推 shines:你用多少伏特去跑? 电压太高有时候胶会溶解 10/01 11:21
2F：→ vbhero:sorry 忘了说是用100volt跑的 0.8%gel，以前跑都没问题 10/01 11:26
3F：→ vbhero:一直到最近才出现胶跑一跑溶掉的情况，溶掉的形状是一条上 10/01 11:27
4F：→ vbhero:下曲折的线 10/01 11:27
5F：推 iceking:八成是buffer的问题,重配吧! 10/01 11:34
6F：推 ranilla:推楼上，上次我也泡错，TRIS和EDTA都弄错， 胶也溶了 10/01 12:23
7F：→ vbhero:Tris 108g 10/01 12:43
8F：→ vbhero:boric acid 55g 10/01 12:44
9F：→ vbhero:EDTA(0.5M pH8.0) 40ml 10/01 12:44
10F：→ vbhero:add H2O to 2L 5Xbuffer 10/01 12:45
11F：→ vbhero:弄错是怎麽个弄错法，我应该不会加错吧 阿阿阿阿 10/01 12:47
12F：推 iceking:固定电压,若buffer离子浓度改变,造成电阻变小,电流会变强 10/01 16:05
13F：→ iceking:导致过热,胶就熔了. 会造成离子改变的原因只有两个, 10/01 16:06
14F：→ iceking:1是配错溶液,2是溶液用太久,浓度已改变. 10/01 16:06
15F：→ iceking:我说的溶液用太久,是说tank里的TBE都没换,却跑了很多片胶 10/01 16:16
16F：→ vbhero:我懂，V=IR P=IV 电流上升，功率增加，产热也增加 10/01 18:01
17F：→ vbhero:这样的话我是不是可以配成0.4X TBE 试试？ 10/01 18:06
18F：→ gryou:500bp 可以用TAE Buffer吧 离子浓度比较低！ 10/01 19:56