作者boblu (六百)
看板Biotech
標題Re: [討論] 請問Western Blotting membrane可以剪嗎?
時間Fri Sep 24 20:47:07 2010
不是可不可以剪的問題
而是 不管剪不剪 一張 membrane 上該有的東西都要有 的問題
有 internal control 是最好
要不然就是剪出來的每一條 membrane 上都要有配 control lane
另外最好也都要有 marker
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其實比較好的想法是 不是剪 membrane, 而是 "併 membrane"
比方說你原本要 load 五個 well（包含 control, marker)
跑出來染兩個抗體
但是你的 gel 有 10 well
那當然可以 load 雙份然後跑完剪開 各自去染不同的抗體
但是你不能說每個 sample load 兩個 well, 跑完剪成一條一條拿去染
至少需 publish quality 的東西不行
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◆ From: 71.10.75.57
1F：→ a001ou:可是這樣無法排除人為刻意或非刻意的loading誤差 而若是 09/25 00:47
這就不是剪不剪 membrane 會影響的啦
要靠 internal control 或所有 membrane 作完都拿去染 coomassie blue
2F：→ a001ou:western sample數不會太少 一般mini gel才10 well 能跑 09/25 00:50
3F：→ a001ou:兩份的機會應該不多 09/25 00:50
看原 po 狀況吧
他說的 以剪開membrane 拿去染不同抗體 取代 stripping
所以我預設 gel 夠給每個 sample load 多份
不然沒道理 sample 1-8 跑完，剪開，1-4 拿去染抗體 A, 2-8 拿去染抗體 B 吧？
4F：→ a001ou:還有一般裁membrane不會裁太靠近 應該不會只裁1條lane這麼 09/25 00:52
5F：→ a001ou:精細的裁切才對 09/25 00:53
※ 編輯: boblu 來自: 131.212.202.90 (09/25 03:30)