作者boblu (六百)
看板Biotech
标题Re: [讨论] 请问Western Blotting membrane可以剪吗?
时间Fri Sep 24 20:47:07 2010
不是可不可以剪的问题
而是 不管剪不剪 一张 membrane 上该有的东西都要有 的问题
有 internal control 是最好
要不然就是剪出来的每一条 membrane 上都要有配 control lane
另外最好也都要有 marker
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其实比较好的想法是 不是剪 membrane, 而是 "并 membrane"
比方说你原本要 load 五个 well（包含 control, marker)
跑出来染两个抗体
但是你的 gel 有 10 well
那当然可以 load 双份然後跑完剪开 各自去染不同的抗体
但是你不能说每个 sample load 两个 well, 跑完剪成一条一条拿去染
至少需 publish quality 的东西不行
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◆ From: 71.10.75.57
1F：→ a001ou:可是这样无法排除人为刻意或非刻意的loading误差 而若是 09/25 00:47
这就不是剪不剪 membrane 会影响的啦
要靠 internal control 或所有 membrane 作完都拿去染 coomassie blue
2F：→ a001ou:western sample数不会太少 一般mini gel才10 well 能跑 09/25 00:50
3F：→ a001ou:两份的机会应该不多 09/25 00:50
看原 po 状况吧
他说的 以剪开membrane 拿去染不同抗体 取代 stripping
所以我预设 gel 够给每个 sample load 多份
不然没道理 sample 1-8 跑完，剪开，1-4 拿去染抗体 A, 2-8 拿去染抗体 B 吧？
4F：→ a001ou:还有一般裁membrane不会裁太靠近 应该不会只裁1条lane这麽 09/25 00:52
5F：→ a001ou:精细的裁切才对 09/25 00:53
※ 编辑: boblu 来自: 131.212.202.90 (09/25 03:30)