作者janhs (賭姬)
看板Biotech
標題[討論] 請問Western Blotting membrane可以剪嗎?
時間Fri Sep 24 13:16:45 2010
想請問各位 作Western Blotting時,transfer完的membrane可以裁剪成條狀
再進行抗體的反應嗎?
也就是說想了解的蛋白質根據其分子量大小裁剪成條狀,
這樣一片membrane可以進行十幾種抗體反應,也一定不會有雜band出現
我家老大禁止這樣做,但實驗室裡有兩派,裁剪的因為速度快就變成紅牌,
沒剪的就像白癡一樣,一種抗體反應完再stripping進行下一種抗體
想請問各位的想法
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◆ From: 211.76.175.170
1F：→ saviora:可以吧 畫完marker後用保鮮膜包起來剪 09/24 13:23
2F：→ crypupa:你覺得呢? 09/24 13:23
3F：推 cecik:剪membrane不是很常用嗎? 沒靠太近的就大致對照marker剪 09/24 13:26
4F：→ cecik:不然如果有很多要看，striping幾次到後來訊號更弱了 09/24 13:27
5F：→ cecik:想請問不支持剪的原因是什麼呢? 09/24 13:28
6F：推 cbeta:之前聽過不支持剪的實驗室，說法是要保持data的完整性， 09/24 13:37
7F：→ cbeta:paper上的圖要是一整張membrane不希望剪裁避免造假嫌疑這樣 09/24 13:37
8F：→ a001ou:一般western可以剪吧 在我們家若做以前沒做過的蛋白或抗體 09/24 13:42
9F：→ a001ou:前幾次會先整張壓確認訊號與抗體品質 確定了以後就可以裁了 09/24 13:42
10F：→ a001ou:至於有些情況可能不適合裁 但這都看實驗設計做決定 09/24 13:43
11F：推 cecik:我覺得如果怕被懷疑造假，也可以先把 membrane scan 起來 09/24 13:43
12F：→ cecik:之後剪完 probe 完後再拼回去，保留起來 09/24 13:44
13F：→ a001ou:否則整張壓所耗費的時間 reagent等資源 卻只得到少少的數據 09/24 13:44
14F：→ a001ou:實在是太浪費了 樓上說scan也是好方法 09/24 13:45
15F：→ blence:ECL時把所有membrane都拼好在壓片或照相,看圖或整理都方便 09/24 13:53
16F：推 tsubasawolfy:都習慣剪好後拼回來...有誰那麼財財一次染整張8*9cm 09/24 15:42
17F：→ a001ou:拼好一起壓片的問題是如果訊號強度差太多 出來的片子會 09/24 16:03
18F：→ a001ou:有點醜 09/24 16:03
19F：推 bider:如果是IP出來的結果 不建議裁剪 會錯過很多訊息 09/24 16:31
20F：→ bider:如果是已經確定的結果 裁剪比較適合 09/24 16:32
21F：推 skiOMG:建議repeat再一張8*10的頂多剪成2-3張!! 09/24 18:13
22F：→ citrinin:是想發 CNS 怕人家要 raw data 嗎? XD 09/24 19:55
23F：推 celestial318:都會剪... 09/25 11:49
24F：→ tincta:repeat時才剪 剛開始試和拼完美data時就整張 有剪會拼回去 09/25 14:05
25F：→ tincta:再照一次 另外IP就不剪了 09/25 14:06