作者janhs (赌姬)
看板Biotech
标题[讨论] 请问Western Blotting membrane可以剪吗?
时间Fri Sep 24 13:16:45 2010
想请问各位 作Western Blotting时,transfer完的membrane可以裁剪成条状
再进行抗体的反应吗?
也就是说想了解的蛋白质根据其分子量大小裁剪成条状,
这样一片membrane可以进行十几种抗体反应,也一定不会有杂band出现
我家老大禁止这样做,但实验室里有两派,裁剪的因为速度快就变成红牌,
没剪的就像白痴一样,一种抗体反应完再stripping进行下一种抗体
想请问各位的想法
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 211.76.175.170
1F：→ saviora:可以吧 画完marker後用保鲜膜包起来剪 09/24 13:23
2F：→ crypupa:你觉得呢? 09/24 13:23
3F：推 cecik:剪membrane不是很常用吗? 没靠太近的就大致对照marker剪 09/24 13:26
4F：→ cecik:不然如果有很多要看，striping几次到後来讯号更弱了 09/24 13:27
5F：→ cecik:想请问不支持剪的原因是什麽呢? 09/24 13:28
6F：推 cbeta:之前听过不支持剪的实验室，说法是要保持data的完整性， 09/24 13:37
7F：→ cbeta:paper上的图要是一整张membrane不希望剪裁避免造假嫌疑这样 09/24 13:37
8F：→ a001ou:一般western可以剪吧 在我们家若做以前没做过的蛋白或抗体 09/24 13:42
9F：→ a001ou:前几次会先整张压确认讯号与抗体品质 确定了以後就可以裁了 09/24 13:42
10F：→ a001ou:至於有些情况可能不适合裁 但这都看实验设计做决定 09/24 13:43
11F：推 cecik:我觉得如果怕被怀疑造假，也可以先把 membrane scan 起来 09/24 13:43
12F：→ cecik:之後剪完 probe 完後再拼回去，保留起来 09/24 13:44
13F：→ a001ou:否则整张压所耗费的时间 reagent等资源 却只得到少少的数据 09/24 13:44
14F：→ a001ou:实在是太浪费了 楼上说scan也是好方法 09/24 13:45
15F：→ blence:ECL时把所有membrane都拼好在压片或照相,看图或整理都方便 09/24 13:53
16F：推 tsubasawolfy:都习惯剪好後拼回来...有谁那麽财财一次染整张8*9cm 09/24 15:42
17F：→ a001ou:拼好一起压片的问题是如果讯号强度差太多 出来的片子会 09/24 16:03
18F：→ a001ou:有点丑 09/24 16:03
19F：推 bider:如果是IP出来的结果 不建议裁剪 会错过很多讯息 09/24 16:31
20F：→ bider:如果是已经确定的结果 裁剪比较适合 09/24 16:32
21F：推 skiOMG:建议repeat再一张8*10的顶多剪成2-3张!! 09/24 18:13
22F：→ citrinin:是想发 CNS 怕人家要 raw data 吗? XD 09/24 19:55
23F：推 celestial318:都会剪... 09/25 11:49
24F：→ tincta:repeat时才剪 刚开始试和拼完美data时就整张 有剪会拼回去 09/25 14:05
25F：→ tincta:再照一次 另外IP就不剪了 09/25 14:06