作者FENOR (FENOR)
看板Biotech
標題[求救] mutagenesis有辦法插13個nucleotides進去嗎?
時間Thu Sep 23 13:10:20 2010
最近做了一個clone，在最尾端的地方出現了一個很怪的現象，
就是最尾端40nt，只做出了其中27個，然後沒做出來的13個是卡在正中間。
primer的原始設計是涵蓋了從尾端數來的22個加上restriction site 10個BP。
這樣的話可以用mutagenesis把loss掉的13個給補進去嗎?
因為之前做mutagenesis都是以點突變為主，還沒有碰過這樣的，
懇請先進賜教
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◆ From: 140.112.135.172
※ 編輯: FENOR 來自: 140.112.135.172 (09/23 13:11)
1F：→ aggaci:可以 我作過插進35 bp的..不過你這情形是不是多挑幾個 09/23 13:40
2F：→ aggaci:比較好 09/23 13:40
3F：→ FENOR:其實是因為每次長都只長一顆...剛好這顆就有中 09/23 13:41
4F：→ FENOR:我總共transform三次，剛好三顆colony 09/23 13:41
5F：推 missal:請問a大是用quikchange插35bp的嗎? 09/24 08:43
6F：推 aggaci:嗯嗯 09/24 08:52
7F：推 missal:請問有什麼技巧嗎? 因為我看quikchange manual 09/24 11:14
8F：→ missal:裡面說不建議做太長的insertion 我之前要放一段差不多大小 09/24 11:15
9F：→ missal:的片段也都放不進去 囧 09/24 11:15
10F：→ Ice9:有時候還是要看你序列的特性：迴文、亂黏等都不好。 10/03 18:10