作者FENOR (FENOR)
看板Biotech
标题[求救] mutagenesis有办法插13个nucleotides进去吗?
时间Thu Sep 23 13:10:20 2010
最近做了一个clone，在最尾端的地方出现了一个很怪的现象，
就是最尾端40nt，只做出了其中27个，然後没做出来的13个是卡在正中间。
primer的原始设计是涵盖了从尾端数来的22个加上restriction site 10个BP。
这样的话可以用mutagenesis把loss掉的13个给补进去吗?
因为之前做mutagenesis都是以点突变为主，还没有碰过这样的，
恳请先进赐教
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◆ From: 140.112.135.172
※ 编辑: FENOR 来自: 140.112.135.172 (09/23 13:11)
1F：→ aggaci:可以 我作过插进35 bp的..不过你这情形是不是多挑几个 09/23 13:40
2F：→ aggaci:比较好 09/23 13:40
3F：→ FENOR:其实是因为每次长都只长一颗...刚好这颗就有中 09/23 13:41
4F：→ FENOR:我总共transform三次，刚好三颗colony 09/23 13:41
5F：推 missal:请问a大是用quikchange插35bp的吗? 09/24 08:43
6F：推 aggaci:嗯嗯 09/24 08:52
7F：推 missal:请问有什麽技巧吗? 因为我看quikchange manual 09/24 11:14
8F：→ missal:里面说不建议做太长的insertion 我之前要放一段差不多大小 09/24 11:15
9F：→ missal:的片段也都放不进去 囧 09/24 11:15
10F：→ Ice9:有时候还是要看你序列的特性：回文、乱黏等都不好。 10/03 18:10