作者fsip1031 (無聊正比於深度)
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標題[求救] 要怎麼在plasmid上接 flag?
時間Wed Sep 22 17:07:14 2010
查過很多資料
都沒有寫得很詳細
不知道有沒有版友能夠提供??
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 220.138.43.203
1F：→ aggaci:quick change 09/22 17:09
2F：→ aggaci:或是合flag的DNA序列，在vector上切一刀或兩刀 把flag接 09/22 17:10
3F：→ aggaci:進去 09/22 17:10
4F：推 kyokolove:簡單作法就是買一個有flag tag vector 09/22 20:42
5F：→ kyokolove:sorry..看錯 是要在plasmid上接flag 那上面比較對~ 09/22 20:44
6F：推 tsubasawolfy:合成flag的兩股 annealing起來 最好設計成兩邊有你 09/23 09:48
7F：→ tsubasawolfy:要塞的re site 省去還要用re處理合好的flag 09/23 09:49
8F：→ tsubasawolfy:enzyme site挑選可以的話用接上去後切不開的 09/23 09:50
9F：→ tsubasawolfy:例如BamHI->BglII 因為flag太短無法用跑膠挑clone 09/23 09:51
10F：推 aggaci:要挑clone 當然可以，colony PCR就可以了.... 09/23 12:45
11F：推 tsubasawolfy:colony pcr是用flag本身當primer? 09/23 13:10
12F：推 aggaci:用vector本身的primer...比如說沒接到的增值出來會是150 bp 09/23 13:37
13F：→ aggaci:有接到的增殖出來會是180 bp....多出來的就是flag的長度 09/23 13:38
14F：→ aggaci:不過我忘了flag多長了 30是我隨便說的數字 09/23 13:38
15F：推 tsubasawolfy:30bp要用acrylamide比較明顯吧? 一般1% agarose gel 09/23 14:51
16F：→ tsubasawolfy:30哪看得出來.. 09/23 14:52
17F：推 icome:用那段合成的FLAG DNA為primer做PCR 若有正確產物表示有進去 09/23 17:29
18F：→ icome:就是其中一隻primer認vector上序列 另一隻認FLAG 做PCR 09/23 17:31
19F：推 aggaci:怎可能用1%? 當然是至少2%! 09/23 22:46
20F：→ aggaci:樓上方法也是可以~ 09/23 22:46