作者fsip1031 (无聊正比於深度)
看板Biotech
标题[求救] 要怎麽在plasmid上接 flag?
时间Wed Sep 22 17:07:14 2010
查过很多资料
都没有写得很详细
不知道有没有版友能够提供??
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.138.43.203
1F：→ aggaci:quick change 09/22 17:09
2F：→ aggaci:或是合flag的DNA序列，在vector上切一刀或两刀 把flag接 09/22 17:10
3F：→ aggaci:进去 09/22 17:10
4F：推 kyokolove:简单作法就是买一个有flag tag vector 09/22 20:42
5F：→ kyokolove:sorry..看错 是要在plasmid上接flag 那上面比较对~ 09/22 20:44
6F：推 tsubasawolfy:合成flag的两股 annealing起来 最好设计成两边有你 09/23 09:48
7F：→ tsubasawolfy:要塞的re site 省去还要用re处理合好的flag 09/23 09:49
8F：→ tsubasawolfy:enzyme site挑选可以的话用接上去後切不开的 09/23 09:50
9F：→ tsubasawolfy:例如BamHI->BglII 因为flag太短无法用跑胶挑clone 09/23 09:51
10F：推 aggaci:要挑clone 当然可以，colony PCR就可以了.... 09/23 12:45
11F：推 tsubasawolfy:colony pcr是用flag本身当primer? 09/23 13:10
12F：推 aggaci:用vector本身的primer...比如说没接到的增值出来会是150 bp 09/23 13:37
13F：→ aggaci:有接到的增殖出来会是180 bp....多出来的就是flag的长度 09/23 13:38
14F：→ aggaci:不过我忘了flag多长了 30是我随便说的数字 09/23 13:38
15F：推 tsubasawolfy:30bp要用acrylamide比较明显吧? 一般1% agarose gel 09/23 14:51
16F：→ tsubasawolfy:30哪看得出来.. 09/23 14:52
17F：推 icome:用那段合成的FLAG DNA为primer做PCR 若有正确产物表示有进去 09/23 17:29
18F：→ icome:就是其中一只primer认vector上序列 另一只认FLAG 做PCR 09/23 17:31
19F：推 aggaci:怎可能用1%? 当然是至少2%! 09/23 22:46
20F：→ aggaci:楼上方法也是可以~ 09/23 22:46