作者reinherd (揚威利信徒萊因哈特)
看板Biotech
標題[討論] 請問各位做western最多stripe 幾次
時間Mon Sep 20 23:17:35 2010
如題
因為我們實驗室過去有個不成文的規矩最多stripe三次
但是因為最近我要一次看很多基因, 所以想說能否一片membrane stripe個4次以上
這樣可以讓我少跑好幾次膠
請問各位版友最多stripe幾次呢?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 161.253.96.25
1F：→ celestial318:我只敢兩次...membrane剪開比較好 09/20 23:54
2F：推 spirithorse:我stripping 三次,前兩次看gene 第三次看Lamin B1 09/21 00:36
3F：推 leoblack:曾經試過5次~效過還可以~不過internal control最後壓就是 09/21 01:04
4F：推 bluecsky:最多壓到三四次 五次以上是怕訊號變的很弱 09/21 06:42
5F：推 skiOMG:剪membrane比較好 真的都同位置就多跑幾片... 09/21 16:57
6F：推 LIAR:我玩過20幾次的（真的只是順便，想看極限） 09/21 23:38
7F：→ LIAR:不過那是SYNAPSIN I本身就強到爆才可以這樣，至於那個p-ERK 09/21 23:38
8F：→ LIAR:就....反正從弱的做到強就對了，另外推剪membrane 09/21 23:39
9F：→ silverberry:都是切成 strip 同時做很多個，不太 striping 的 >"< 09/22 12:52
10F：→ tengjing:看不太懂樓上想表達什麼..... 09/22 22:33
我大概懂樓上的意思
假設說 我要看三組基因 E-cadherin/beta catenin/Twist
我過去的做法是先probe Twist>stripe->E-cadherin>catenin>actin(ctrl)
但是 這三個基因加internal ctrl其實分子量差距很大
所以可以把membrane在blocking結束後直接切成四塊分別probe
這樣就不需要做stripping了
好方法 我下次要試試看
ptt果然就甘心ㄟ
※ 編輯: reinherd 來自: 161.253.96.25 (09/22 23:38)
11F：推 silverberry:感謝原 po^^ 09/25 00:15
12F：推 silverberry:不過我 test 的時候在這樣做，如果是要 publish 的 09/25 00:20
13F：→ silverberry:我會乖乖的多跑幾片來做~ 請參考樓下 j 大文 09/25 00:21