作者reinherd (扬威利信徒莱因哈特)
看板Biotech
标题[讨论] 请问各位做western最多stripe 几次
时间Mon Sep 20 23:17:35 2010
如题
因为我们实验室过去有个不成文的规矩最多stripe三次
但是因为最近我要一次看很多基因, 所以想说能否一片membrane stripe个4次以上
这样可以让我少跑好几次胶
请问各位版友最多stripe几次呢?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 161.253.96.25
1F：→ celestial318:我只敢两次...membrane剪开比较好 09/20 23:54
2F：推 spirithorse:我stripping 三次,前两次看gene 第三次看Lamin B1 09/21 00:36
3F：推 leoblack:曾经试过5次~效过还可以~不过internal control最後压就是 09/21 01:04
4F：推 bluecsky:最多压到三四次 五次以上是怕讯号变的很弱 09/21 06:42
5F：推 skiOMG:剪membrane比较好 真的都同位置就多跑几片... 09/21 16:57
6F：推 LIAR:我玩过20几次的（真的只是顺便，想看极限） 09/21 23:38
7F：→ LIAR:不过那是SYNAPSIN I本身就强到爆才可以这样，至於那个p-ERK 09/21 23:38
8F：→ LIAR:就....反正从弱的做到强就对了，另外推剪membrane 09/21 23:39
9F：→ silverberry:都是切成 strip 同时做很多个，不太 striping 的 >"< 09/22 12:52
10F：→ tengjing:看不太懂楼上想表达什麽..... 09/22 22:33
我大概懂楼上的意思
假设说 我要看三组基因 E-cadherin/beta catenin/Twist
我过去的做法是先probe Twist>stripe->E-cadherin>catenin>actin(ctrl)
但是 这三个基因加internal ctrl其实分子量差距很大
所以可以把membrane在blocking结束後直接切成四块分别probe
这样就不需要做stripping了
好方法 我下次要试试看
ptt果然就甘心ㄟ
※ 编辑: reinherd 来自: 161.253.96.25 (09/22 23:38)
11F：推 silverberry:感谢原 po^^ 09/25 00:15
12F：推 silverberry:不过我 test 的时候在这样做，如果是要 publish 的 09/25 00:20
13F：→ silverberry:我会乖乖的多跑几片来做~ 请参考楼下 j 大文 09/25 00:21