作者yesdora (話不投機半句多)
看板Biotech
標題[求救] 請問ECL液可以重覆使用嗎？
時間Mon Sep 20 18:40:02 2010
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想請問也有在做western blot的版友們
新手上路，遇到不少問題還請大家教教我！
我實驗室的步驟是電泳後，transfer到PVDF膜上
1抗隔夜、TBST洗淨、2抗45分鐘、TBST洗淨、ECL(GE Healthcare)1、2液混合靜置1分
之後夾到塑膠片內，拿去照相。
所有的步驟都沒有在暗房操作。
到目前為止大概想得到的band都有照出來。
我想請問的是ECL液是不是只能使用一次就不行了呢？
因為最近都同時2片一起跑，操作時間相隔20~30分鐘左右
看了說明書也沒特別寫到能不能重覆使用，有提到在常溫下1小時內穩定。
但應該是非混合狀態下吧…我完全不確定。
昨天有給它試著沾第2片，拍是有拍出來，但不曉得是target protein不明顯還是這緣故
band實在不是很明顯…
問了畢業的學姐，她說ECL不行，但ECL plus可以重覆使用3次左右
另外還想問的是…
1> ECL1、2液混合後、靜置時需要遮光比較好嗎？(我目前是都蓋鋁箔紙…)
2> ECL plus若要重覆使用，請問該怎麼保存比較好呢？
第2、3次使用時除了靜置時間加長外還有什麼要注意的嗎？
還有今天在做新的1抗時，因為一次做2支，1支加了抗體之後沒有馬上做記號
去拿個筆回來就忘了自己到底加到哪支去了…(真是有夠蠢的我知道@@)
看老半天完全看不出來…
有什麼方法可以分辨的嗎？？
謝謝大家的指教…
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 160.11.143.94
1F：→ ordinary07:我都一次沾7-8小片 但是越後面效果越差 還有廠牌也有差 09/20 18:55
2F：→ ordinary07:不過我間隔時間不像你這麼長 09/20 18:56
3F：→ blence:把你們的ECL reagent拿出來,根據上面型號去產品網站查尋,不 09/20 19:29
4F：→ blence:但可以凡事受學長姊指教,又可以自己學到知識 09/20 19:30
5F：→ yesdora:請問o版友，你是沾了之後就放著嗎？因為我不確定能不能這 09/20 20:41
6F：→ yesdora:樣，所以才把間隔時間拉長…。 09/20 20:41
7F：→ yesdora:b版友，我上網查過了，說明書也看了，老師和學姐都不太清 09/20 20:42
8F：→ yesdora:楚，所以才上來詢問大家的… 09/20 20:42
9F：推 bluecsky:混合後不能保存再使用吧..但是一次混合沾多片是可以的 09/20 20:59
10F：→ bluecsky:能沾幾片就要稍微自己經驗嘗試 廠商大多是跟你說大概涵蓋 09/20 21:00
11F：→ bluecsky:面積能有多少 信或不信也是看你摟.. 09/20 21:00
12F：→ genep:試試看就知道了. 09/20 21:45
13F：→ celestial318:不敢reuse 有時候壓很多片後面的都出不來了... 09/20 23:56
14F：推 allisa:我混合後會避光 有reuse過(一次壓四片) 但是中間間隔不長 09/21 05:56
15F：推 liangray:ECL一混合完就要用 因為他的活性會degrade所以都不reuse 09/21 15:58
16F：→ lsalber:想一想為什麼原廠要分成兩罐儲存而不是混成一罐儲存? 09/21 21:54
17F：→ yesdora:昨天試了一下，好像連續沾的話ok，但沾好之後大家會放嗎？ 09/22 09:07
18F：→ yesdora:因為拍照一次只能一張，這中間等的時間遮光比較好嗎？謝謝 09/22 09:08
19F：推 silverberry:有廠商的 working solution 室溫可以穩定 24 hrs 09/22 12:49
20F：→ silverberry:印象中手冊都會寫。 09/22 12:49
21F：→ silverberry:在黑暗中配，一小時內照幾片算幾片~然後再重配 09/22 12:51
22F：→ silverberry:膜都是沾過就拿出來，不會泡在裡面 09/22 12:52