作者yesdora (话不投机半句多)
看板Biotech
标题[求救] 请问ECL液可以重覆使用吗？
时间Mon Sep 20 18:40:02 2010
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想请问也有在做western blot的版友们
新手上路，遇到不少问题还请大家教教我！
我实验室的步骤是电泳後，transfer到PVDF膜上
1抗隔夜、TBST洗净、2抗45分钟、TBST洗净、ECL(GE Healthcare)1、2液混合静置1分
之後夹到塑胶片内，拿去照相。
所有的步骤都没有在暗房操作。
到目前为止大概想得到的band都有照出来。
我想请问的是ECL液是不是只能使用一次就不行了呢？
因为最近都同时2片一起跑，操作时间相隔20~30分钟左右
看了说明书也没特别写到能不能重覆使用，有提到在常温下1小时内稳定。
但应该是非混合状态下吧…我完全不确定。
昨天有给它试着沾第2片，拍是有拍出来，但不晓得是target protein不明显还是这缘故
band实在不是很明显…
问了毕业的学姐，她说ECL不行，但ECL plus可以重覆使用3次左右
另外还想问的是…
1> ECL1、2液混合後、静置时需要遮光比较好吗？(我目前是都盖铝箔纸…)
2> ECL plus若要重覆使用，请问该怎麽保存比较好呢？
第2、3次使用时除了静置时间加长外还有什麽要注意的吗？
还有今天在做新的1抗时，因为一次做2支，1支加了抗体之後没有马上做记号
去拿个笔回来就忘了自己到底加到哪支去了…(真是有够蠢的我知道@@)
看老半天完全看不出来…
有什麽方法可以分辨的吗？？
谢谢大家的指教…
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 160.11.143.94
1F：→ ordinary07:我都一次沾7-8小片 但是越後面效果越差 还有厂牌也有差 09/20 18:55
2F：→ ordinary07:不过我间隔时间不像你这麽长 09/20 18:56
3F：→ blence:把你们的ECL reagent拿出来,根据上面型号去产品网站查寻,不 09/20 19:29
4F：→ blence:但可以凡事受学长姊指教,又可以自己学到知识 09/20 19:30
5F：→ yesdora:请问o版友，你是沾了之後就放着吗？因为我不确定能不能这 09/20 20:41
6F：→ yesdora:样，所以才把间隔时间拉长…。 09/20 20:41
7F：→ yesdora:b版友，我上网查过了，说明书也看了，老师和学姐都不太清 09/20 20:42
8F：→ yesdora:楚，所以才上来询问大家的… 09/20 20:42
9F：推 bluecsky:混合後不能保存再使用吧..但是一次混合沾多片是可以的 09/20 20:59
10F：→ bluecsky:能沾几片就要稍微自己经验尝试 厂商大多是跟你说大概涵盖 09/20 21:00
11F：→ bluecsky:面积能有多少 信或不信也是看你搂.. 09/20 21:00
12F：→ genep:试试看就知道了. 09/20 21:45
13F：→ celestial318:不敢reuse 有时候压很多片後面的都出不来了... 09/20 23:56
14F：推 allisa:我混合後会避光 有reuse过(一次压四片) 但是中间间隔不长 09/21 05:56
15F：推 liangray:ECL一混合完就要用 因为他的活性会degrade所以都不reuse 09/21 15:58
16F：→ lsalber:想一想为什麽原厂要分成两罐储存而不是混成一罐储存? 09/21 21:54
17F：→ yesdora:昨天试了一下，好像连续沾的话ok，但沾好之後大家会放吗？ 09/22 09:07
18F：→ yesdora:因为拍照一次只能一张，这中间等的时间遮光比较好吗？谢谢 09/22 09:08
19F：推 silverberry:有厂商的 working solution 室温可以稳定 24 hrs 09/22 12:49
20F：→ silverberry:印象中手册都会写。 09/22 12:49
21F：→ silverberry:在黑暗中配，一小时内照几片算几片~然後再重配 09/22 12:51
22F：→ silverberry:膜都是沾过就拿出来，不会泡在里面 09/22 12:52