作者bagagirl (就是愛發呆)
看板Biotech
標題[求救] 用TRIZOL抽RNA
時間Wed Sep 15 14:52:09 2010
我是用TRIZOL抽RNA
加入1ml TRIZOL打散細胞 靜置5min
加入0.2ml chloform 上下混合 靜置3min
離心11000g 4度 15分鐘
取最上層液
之前抽的時候上層液都很漂亮 清澈透明
可是最近上層液都呈現粉紅色>"<
雖然繼續往後作 RNA的品質和轉cDNA、PCR都OK
可是總覺得心裡怪怪的...
請問有可能是什麼原因呢?
我有換一罐chloform 結果還是一樣..?????
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.94.157
1F：推 mandible:換一貫trizol阿! 09/15 16:11
2F：→ iceking:MEDIUM沒有用PBS洗乾淨? 09/15 17:42
3F：→ skycaro:應該是medium殘留唷～ 09/15 18:17
4F：推 iris416:我也曾經這樣!!但我不是medium的問題~因為我是直接從血球 09/15 18:51
5F：→ iris416:抽細胞出來用TRIzol抽RNA...也曾經這樣~~後來發現是我加 09/15 18:51
6F：→ iris416:chloform之後沒有"劇烈"的vortex...要很強烈的vortex10秒 09/15 18:52
7F：→ iris416:左右...因為chloform是有機溶劑會讓整管分層...你要先打亂 09/15 18:53
8F：→ iris416:分層的界線再使用離心的方式...離完心才會得到清澈水層 09/15 18:54
9F：→ iris416:推測那粉紅色就是沒有離下去的protein(蛋白質要在最下層) 09/15 18:55
10F：→ iris416:這樣你的RNA很容易會不純 09/15 18:55
11F：推 lulusa:要先打成草莓牛奶色之後才能靜置吧 09/15 20:13
12F：推 ericial:推樓上 要草莓牛奶色才能靜置 09/15 22:35
13F：推 vancent:好酷的PROTOCOL~時間跟我們的差十倍.... 09/15 23:06
14F：→ genep:"酷"點在哪? 09/16 04:15
15F：推 a001ou:一般trizol的實驗步驟就是這樣阿? 就算自己配也差不多 09/16 11:50
16F：→ a001ou:不會差到10倍這麼久吧 09/16 11:50
17F：推 Fourfish:推4F 應該是不夠劇烈 再粗魯一點試試看吧! 09/16 21:52
18F：推 iris416:我之前因為怕RNA斷掉所以不敢vortex太用力..結果離心好幾 09/16 23:32
19F：→ iris416:次...後來看學姊做才知道原來要暴力一點對它XD 雖然我一直 09/16 23:33
20F：→ iris416:心裡有個疑問這樣RNA難道不會斷嗎..>"< 09/16 23:33
21F：推 icome:vortex 10秒而已 還好吧 09/17 12:27
22F：推 tsuyo0105:用手搖晃30秒 09/18 18:44
23F：推 skiOMG:請愛用你的雙手用搖的 30-60秒....(持續~搖到手酸) 09/20 15:25