作者bagagirl (就是爱发呆)
看板Biotech
标题[求救] 用TRIZOL抽RNA
时间Wed Sep 15 14:52:09 2010
我是用TRIZOL抽RNA
加入1ml TRIZOL打散细胞 静置5min
加入0.2ml chloform 上下混合 静置3min
离心11000g 4度 15分钟
取最上层液
之前抽的时候上层液都很漂亮 清澈透明
可是最近上层液都呈现粉红色>"<
虽然继续往後作 RNA的品质和转cDNA、PCR都OK
可是总觉得心里怪怪的...
请问有可能是什麽原因呢?
我有换一罐chloform 结果还是一样..?????
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.94.157
1F：推 mandible:换一贯trizol阿! 09/15 16:11
2F：→ iceking:MEDIUM没有用PBS洗乾净? 09/15 17:42
3F：→ skycaro:应该是medium残留唷～ 09/15 18:17
4F：推 iris416:我也曾经这样!!但我不是medium的问题~因为我是直接从血球 09/15 18:51
5F：→ iris416:抽细胞出来用TRIzol抽RNA...也曾经这样~~後来发现是我加 09/15 18:51
6F：→ iris416:chloform之後没有"剧烈"的vortex...要很强烈的vortex10秒 09/15 18:52
7F：→ iris416:左右...因为chloform是有机溶剂会让整管分层...你要先打乱 09/15 18:53
8F：→ iris416:分层的界线再使用离心的方式...离完心才会得到清澈水层 09/15 18:54
9F：→ iris416:推测那粉红色就是没有离下去的protein(蛋白质要在最下层) 09/15 18:55
10F：→ iris416:这样你的RNA很容易会不纯 09/15 18:55
11F：推 lulusa:要先打成草莓牛奶色之後才能静置吧 09/15 20:13
12F：推 ericial:推楼上 要草莓牛奶色才能静置 09/15 22:35
13F：推 vancent:好酷的PROTOCOL~时间跟我们的差十倍.... 09/15 23:06
14F：→ genep:"酷"点在哪? 09/16 04:15
15F：推 a001ou:一般trizol的实验步骤就是这样阿? 就算自己配也差不多 09/16 11:50
16F：→ a001ou:不会差到10倍这麽久吧 09/16 11:50
17F：推 Fourfish:推4F 应该是不够剧烈 再粗鲁一点试试看吧! 09/16 21:52
18F：推 iris416:我之前因为怕RNA断掉所以不敢vortex太用力..结果离心好几 09/16 23:32
19F：→ iris416:次...後来看学姊做才知道原来要暴力一点对它XD 虽然我一直 09/16 23:33
20F：→ iris416:心里有个疑问这样RNA难道不会断吗..>"< 09/16 23:33
21F：推 icome:vortex 10秒而已 还好吧 09/17 12:27
22F：推 tsuyo0105:用手摇晃30秒 09/18 18:44
23F：推 skiOMG:请爱用你的双手用摇的 30-60秒....(持续~摇到手酸) 09/20 15:25