作者lacrimal0710 (小老鼠)
看板Biotech
標題[求救] 想請問random primer 跑PCR的條件 ~(>< 急)
時間Sat Sep 11 00:10:55 2010
我有一個未知的病毒
想知道他的DNA序列
老闆希望我用random primer 去做PCR
所以我訂了兩條
分別是NNNNNNA NNNNNNG
但是我不知道PCR的條件該怎麼設
因為他的Tm值是負的 @@
paper 上的條件幾乎都是RT
我就用了一般的條件試試看
做了兩組: 兩條primer 都加 , 只加一條primer
條件是 50度西 35個cycle
但是都沒東西~完全沒有條帶
不知道有沒有人用random primer 做過PCR
可以給我點建議?
謝謝~
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◆ From: 220.141.46.65
1F：→ soom:先把病毒DNA打斷做成Library，再做sequencing會不會比較快？ 09/11 00:31
2F：推 mattmatt:之前做6base randam primer PCR設在40~45之間,usually 42 09/11 03:34
3F：→ mattmatt:但那是for RAPD,病毒不大的話不如直接定序... 09/11 03:37
4F：→ lacrimal0710:直接定序要怎麼定? 是直接把整管DNA送定序公司嗎? 09/11 10:06
5F：→ lacrimal0710:我查過一般好像是用限制酵素切之後接TA再去定序 09/11 10:27
6F：→ lacrimal0710:但老闆堅持要random primer......... 09/11 10:28
7F：推 mattmatt:限制酵素或PCR處理 clone起來再做primer walking定序 09/12 03:33
8F：推 iceking:直接用gradient PCR找溫度會不會比較快~ 09/13 11:47