作者lacrimal0710 (小老鼠)
看板Biotech
标题[求救] 想请问random primer 跑PCR的条件 ~(>< 急)
时间Sat Sep 11 00:10:55 2010
我有一个未知的病毒
想知道他的DNA序列
老板希望我用random primer 去做PCR
所以我订了两条
分别是NNNNNNA NNNNNNG
但是我不知道PCR的条件该怎麽设
因为他的Tm值是负的 @@
paper 上的条件几乎都是RT
我就用了一般的条件试试看
做了两组: 两条primer 都加 , 只加一条primer
条件是 50度西 35个cycle
但是都没东西~完全没有条带
不知道有没有人用random primer 做过PCR
可以给我点建议?
谢谢~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.141.46.65
1F：→ soom:先把病毒DNA打断做成Library，再做sequencing会不会比较快？ 09/11 00:31
2F：推 mattmatt:之前做6base randam primer PCR设在40~45之间,usually 42 09/11 03:34
3F：→ mattmatt:但那是for RAPD,病毒不大的话不如直接定序... 09/11 03:37
4F：→ lacrimal0710:直接定序要怎麽定? 是直接把整管DNA送定序公司吗? 09/11 10:06
5F：→ lacrimal0710:我查过一般好像是用限制酵素切之後接TA再去定序 09/11 10:27
6F：→ lacrimal0710:但老板坚持要random primer......... 09/11 10:28
7F：推 mattmatt:限制酵素或PCR处理 clone起来再做primer walking定序 09/12 03:33
8F：推 iceking:直接用gradient PCR找温度会不会比较快~ 09/13 11:47