作者spirithorse (咩)
看板Biotech
標題[方法] 請問western 的transfer buffer
時間Wed Sep 8 00:34:41 2010
目前LAB的western transfer buffer配方是Glycine Tris 20% methanol
transfer 110 mA O/N
可是染SDS gel 還是有很多沒有transfer 過去
於是我問到別間LAB配方,多加了2% SDS
一樣是110 mA 時間縮短到1 小時,染SDS gel明顯很多都可以transfer過去
但是要收transfer的時候可以看到負極的那半會有很多泡泡
[都在cold room跑] 而且在膠上也會看到有格紋(夾子的框框)
老師是推測溫度可能過高
請問有經驗的大大...加了2% SDS真的會促使溫度過高嘛?
還是我需要降低SDS的含量 (最後收transfer是110 mA 51V 固定mA )
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◆ From: 112.104.199.14
※ 編輯: spirithorse 來自: 112.104.199.14 (09/08 00:35)
1F：→ chaunen:2%不會太多嗎@@? 09/08 00:52
2F：推 bluecsky:你要transfer很大的分子量的蛋白嗎? 09/08 06:12
3F：→ gryou:格紋好像是因為夾太緊 你有放stir去均衡buffer嗎？ 09/08 09:08
4F：→ spirithorse:to bluecsky: 我的protein 70-80 KDa 09/08 10:31
5F：→ spirithorse:to gryou: 我夾的厚度用不加SDS的buffer是OK的 09/08 10:32
6F：→ spirithorse:但是我都沒用stir耶y 09/08 10:32
7F：推 tsubasawolfy:泡泡是你電解水後產生的吧..SDS提供起泡的環境 09/08 11:44
8F：→ tsubasawolfy:另外70-80用你這條件跑沒加SDS一樣過得去..你家原本 09/08 11:45
9F：→ tsubasawolfy:buffer會不會太奇怪了.. 09/08 11:45
10F：→ spirithorse:to tsubasawolfy:Glycin+Tris+methanol是我問過最普遍 09/08 12:42
11F：→ spirithorse:的buffer耶 09/08 12:42
12F：→ iceking:不需要加SDS. 我都是300mA 放4度C冰箱 跑1.5hr 09/08 13:37
13F：推 tsubasawolfy:對呀 所以才覺得奇怪 09/08 13:51
14F：推 bluecsky:70~80KD完全不用加SDS...用一般條件放cold room跑就好 09/08 14:18
15F：→ bluecsky:一般buffer就跟你用的差不多阿.. 09/08 14:19
17F：→ blence:那個實驗室用2%SDS?你們交情不好嗎?一般用量連google都有 09/08 15:47
18F：推 bluecsky:幾% gel? 沒marker我看不太懂哪裡慘 orz 09/08 19:35
19F：→ bluecsky:當然你加2%SDS的是滿慘的啦XD 09/08 19:35
20F：→ bluecsky:歐歐 這是transfer完後的PAGE歐..那還真的是.. 09/08 19:36
21F：→ bluecsky:我們lab是直接400mA 4hr 在cold room跑 都很ok 09/08 19:37
22F：→ spirithorse:to bluecsky: 我下次試試看 謝謝^^ 09/09 13:23