作者spirithorse (咩)
看板Biotech
标题[方法] 请问western 的transfer buffer
时间Wed Sep 8 00:34:41 2010
目前LAB的western transfer buffer配方是Glycine Tris 20% methanol
transfer 110 mA O/N
可是染SDS gel 还是有很多没有transfer 过去
於是我问到别间LAB配方,多加了2% SDS
一样是110 mA 时间缩短到1 小时,染SDS gel明显很多都可以transfer过去
但是要收transfer的时候可以看到负极的那半会有很多泡泡
[都在cold room跑] 而且在胶上也会看到有格纹(夹子的框框)
老师是推测温度可能过高
请问有经验的大大...加了2% SDS真的会促使温度过高嘛?
还是我需要降低SDS的含量 (最後收transfer是110 mA 51V 固定mA )
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◆ From: 112.104.199.14
※ 编辑: spirithorse 来自: 112.104.199.14 (09/08 00:35)
1F：→ chaunen:2%不会太多吗@@? 09/08 00:52
2F：推 bluecsky:你要transfer很大的分子量的蛋白吗? 09/08 06:12
3F：→ gryou:格纹好像是因为夹太紧 你有放stir去均衡buffer吗？ 09/08 09:08
4F：→ spirithorse:to bluecsky: 我的protein 70-80 KDa 09/08 10:31
5F：→ spirithorse:to gryou: 我夹的厚度用不加SDS的buffer是OK的 09/08 10:32
6F：→ spirithorse:但是我都没用stir耶y 09/08 10:32
7F：推 tsubasawolfy:泡泡是你电解水後产生的吧..SDS提供起泡的环境 09/08 11:44
8F：→ tsubasawolfy:另外70-80用你这条件跑没加SDS一样过得去..你家原本 09/08 11:45
9F：→ tsubasawolfy:buffer会不会太奇怪了.. 09/08 11:45
10F：→ spirithorse:to tsubasawolfy:Glycin+Tris+methanol是我问过最普遍 09/08 12:42
11F：→ spirithorse:的buffer耶 09/08 12:42
12F：→ iceking:不需要加SDS. 我都是300mA 放4度C冰箱 跑1.5hr 09/08 13:37
13F：推 tsubasawolfy:对呀 所以才觉得奇怪 09/08 13:51
14F：推 bluecsky:70~80KD完全不用加SDS...用一般条件放cold room跑就好 09/08 14:18
15F：→ bluecsky:一般buffer就跟你用的差不多阿.. 09/08 14:19
17F：→ blence:那个实验室用2%SDS?你们交情不好吗?一般用量连google都有 09/08 15:47
18F：推 bluecsky:几% gel? 没marker我看不太懂哪里惨 orz 09/08 19:35
19F：→ bluecsky:当然你加2%SDS的是满惨的啦XD 09/08 19:35
20F：→ bluecsky:欧欧 这是transfer完後的PAGE欧..那还真的是.. 09/08 19:36
21F：→ bluecsky:我们lab是直接400mA 4hr 在cold room跑 都很ok 09/08 19:37
22F：→ spirithorse:to bluecsky: 我下次试试看 谢谢^^ 09/09 13:23