作者zzfly (蒼蠅)
看板Biotech
標題[求救] COLO205的培養方法
時間Thu Sep 2 17:01:33 2010
有沒有人養過這株細胞呢？
原本形狀應該是圓形並排單層長，有些是漂浮在培養液中
可是在我手上養一陣子，就會開始堆疊（感覺是葡萄球狀黏在一起）
而且細胞型態也會變的不圓
此時若用trypsin打下（1:4分盤第一天），細胞貼好後會回覆圓形單顆狀態（第二天）
但換完培養液的隔天（第三天），即使細胞滿度約五分
仍舊會緊緊黏疊在一起，飄在培養液的細胞也會變少(有飄也是細胞碎片)
培養液的顏色一下就會變黃（第三天），但看不到混濁或顯微鏡下有異物出現
繼續養下去，只有在打下細胞的第二天會是完整的圓形
黏疊的情況只會越來越嚴重............
已請實驗室有養過這株的前輩全程看過，前輩也覺得我操作手法沒問題
但這株細胞在我手上就是無法維持圓形單層貼附的狀態，漂浮的健康細胞越來越少
（詭異的是在前輩手上是沒問題的 T.T）
做過medium test 也無污染
手上其他株細胞也沒問題，就這株一直養不好
前輩走了，總不能靠重複解凍過活........
請問養過這株細胞的人有沒有什麼訣竅可以傳授嗎？
以下是實驗條件：
medium: RPMI 1640
以MQ水配，加入glucose、sodium bicarbonate、HEPES後調pH 7.2
0.22um 過濾
另加入glutamine、FBS、三合一抗生素
打下細胞所用trypsin 1-2ml/T75，平常1:4分盤，約四天會滿
麻煩有經驗的人賜教！謝謝大家
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◆ From: 140.128.143.136
1F：推 malakaki:測一下Mycoplasma，沒有問題的話，是正常現象 09/04 07:09
2F：→ malakaki:我之前colo 205只要養太密就會這樣 09/04 07:10
3F：→ popo7340:只要有堆疊或者沒有呈現圓形~~基本上做實驗就不准 09/04 20:52
4F：→ zzfly:目前換了較好的血清，也使用滅菌水配培養液，另一位同仁也用 09/16 16:01
5F：→ zzfly:DAPI染色，沒見到mycroplasma污染，但至少細胞目前是圓圓的 09/16 16:02
6F：→ zzfly:疊在一起，我想是無解了 T.T 09/16 16:02
7F：→ zzfly:拼錯，是Mycoplasma，總而言之，還是謝謝兩位的意見！ 09/16 16:04