作者zzfly (苍蝇)
看板Biotech
标题[求救] COLO205的培养方法
时间Thu Sep 2 17:01:33 2010
有没有人养过这株细胞呢？
原本形状应该是圆形并排单层长，有些是漂浮在培养液中
可是在我手上养一阵子，就会开始堆叠（感觉是葡萄球状黏在一起）
而且细胞型态也会变的不圆
此时若用trypsin打下（1:4分盘第一天），细胞贴好後会回覆圆形单颗状态（第二天）
但换完培养液的隔天（第三天），即使细胞满度约五分
仍旧会紧紧黏叠在一起，飘在培养液的细胞也会变少(有飘也是细胞碎片)
培养液的颜色一下就会变黄（第三天），但看不到混浊或显微镜下有异物出现
继续养下去，只有在打下细胞的第二天会是完整的圆形
黏叠的情况只会越来越严重............
已请实验室有养过这株的前辈全程看过，前辈也觉得我操作手法没问题
但这株细胞在我手上就是无法维持圆形单层贴附的状态，漂浮的健康细胞越来越少
（诡异的是在前辈手上是没问题的 T.T）
做过medium test 也无污染
手上其他株细胞也没问题，就这株一直养不好
前辈走了，总不能靠重复解冻过活........
请问养过这株细胞的人有没有什麽诀窍可以传授吗？
以下是实验条件：
medium: RPMI 1640
以MQ水配，加入glucose、sodium bicarbonate、HEPES後调pH 7.2
0.22um 过滤
另加入glutamine、FBS、三合一抗生素
打下细胞所用trypsin 1-2ml/T75，平常1:4分盘，约四天会满
麻烦有经验的人赐教！谢谢大家
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.143.136
1F：推 malakaki:测一下Mycoplasma，没有问题的话，是正常现象 09/04 07:09
2F：→ malakaki:我之前colo 205只要养太密就会这样 09/04 07:10
3F：→ popo7340:只要有堆叠或者没有呈现圆形~~基本上做实验就不准 09/04 20:52
4F：→ zzfly:目前换了较好的血清，也使用灭菌水配培养液，另一位同仁也用 09/16 16:01
5F：→ zzfly:DAPI染色，没见到mycroplasma污染，但至少细胞目前是圆圆的 09/16 16:02
6F：→ zzfly:叠在一起，我想是无解了 T.T 09/16 16:02
7F：→ zzfly:拼错，是Mycoplasma，总而言之，还是谢谢两位的意见！ 09/16 16:04