作者trp9999 (快活似神仙)
看板Biotech
標題[求救] 關於Western SDS-page之gel製作的問題
時間Sat Aug 28 15:46:37 2010
請問為什麼我做的SDS-PAGE跑起來,
在Running Gel的中間會有分層呢?
我是用bio-rad的gel running system,玻璃中間厚度是1.0mm的mini gel,
我之前原本跑得好好的,
忽然有一天跑的時候發現我的protein marker卡在running的中間下不來,
仔細一看會發現gel中間有一個很直的分層(平行於桌面)在那裏,
而所有約三十幾以上的marker就都卡在那條線上了,
之前有和bio-rad的工程師討論,他說有可能是Gel凝膠的問題,
他要我減低TEMED的量,且要我gel只要上下搖晃一下就可以加了(避免氣泡影響凝膠),
但是我跑了以後還是一樣會有分層出現,
想請問一下各位高手還有甚麼改進的可能性嗎?
感謝囉~~~~
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◆ From: 140.119.180.95
※ 編輯: trp9999 來自: 140.119.180.95 (08/28 15:47)
1F：→ ordinary07:下膠凝固後 再加上層 gel 間隔時間太久 下膠接觸空氣 08/28 17:41
2F：→ ordinary07:結果有點乾掉? 我只想到這個 冏 08/28 17:42
3F：→ sniker:樓上@@? 不是有異丙醇嗎 也會接觸到空氣喔 08/28 18:07
4F：→ ordinary07:我是指去掉水或異丙醇到加上層gel的時間 XD 08/28 18:09
5F：推 Ianthegood:元po是說running gel的中間吧? 08/28 20:19
6F：→ nymph:marker卡在那條線上 那sample也有卡住嗎?? 08/29 23:12
7F：→ trp9999:sample應該也是有卡住 08/30 13:08
8F：→ trp9999:之前想說是不是marker的問題,但是我跟其他的實驗室借marke 08/30 13:08
9F：→ trp9999:借marker來跑還是一樣 08/30 13:09
10F：→ nymph:要不要用更高%的gel來試試看?? 你是買已經混合好的配方嗎?? 08/30 20:38
11F：→ iuy:我有遇過這情形 用到14%還是會有分層現象 08/30 21:00
12F：推 datro:isopropanol沒洗乾淨? 上膠凝太久拔COMB拉起來? 08/30 21:35
13F：推 Fourfish:確定是膠有斷開?還是只是跑到一半跑不下去?tracing dye呢 08/31 10:45
14F：→ Fourfish:若膠斷開 檢查一下玻璃看看.若跑不下去 檢查buffer 08/31 10:48
15F：→ Fourfish:running buffer不知道你會不會reuse 會的話用新的跑看看 08/31 10:49
16F：→ trp9999:gel拿起來是沒有斷掉 只是好像那條線上下濃度不一樣? 08/31 21:17
17F：→ trp9999:buffer是用新的 東西還是會跑下去 08/31 21:18
18F：→ trp9999:只是到那條線的時候會卡很久 08/31 21:18
19F：→ trp9999:等到30以上的marker都卡成一條線了才跑下去= =+ 08/31 21:19
20F：→ trp9999:to iuy不知道你到最後是怎麼解決的呢~ 08/31 21:22
21F：→ iuy:首先請問你要看多少kD的protein? 09/01 11:50
22F：→ iuy:我到最後還是沒有完全解決 但是拿跑出我要看的東西就好 09/01 11:51
23F：→ trp9999:40~75kD之間 09/03 10:31
24F：→ trp9999:意思是說在分層之前就把要的東西分開囉? 09/03 10:34
25F：→ iuy:我的情況是讓膠繼續跑 那條分層就會往下移動 就可以分開 09/03 16:11