作者trp9999 (快活似神仙)
看板Biotech
标题[求救] 关於Western SDS-page之gel制作的问题
时间Sat Aug 28 15:46:37 2010
请问为什麽我做的SDS-PAGE跑起来,
在Running Gel的中间会有分层呢?
我是用bio-rad的gel running system,玻璃中间厚度是1.0mm的mini gel,
我之前原本跑得好好的,
忽然有一天跑的时候发现我的protein marker卡在running的中间下不来,
仔细一看会发现gel中间有一个很直的分层(平行於桌面)在那里,
而所有约三十几以上的marker就都卡在那条线上了,
之前有和bio-rad的工程师讨论,他说有可能是Gel凝胶的问题,
他要我减低TEMED的量,且要我gel只要上下摇晃一下就可以加了(避免气泡影响凝胶),
但是我跑了以後还是一样会有分层出现,
想请问一下各位高手还有甚麽改进的可能性吗?
感谢罗~~~~
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◆ From: 140.119.180.95
※ 编辑: trp9999 来自: 140.119.180.95 (08/28 15:47)
1F：→ ordinary07:下胶凝固後 再加上层 gel 间隔时间太久 下胶接触空气 08/28 17:41
2F：→ ordinary07:结果有点乾掉? 我只想到这个 冏 08/28 17:42
3F：→ sniker:楼上@@? 不是有异丙醇吗 也会接触到空气喔 08/28 18:07
4F：→ ordinary07:我是指去掉水或异丙醇到加上层gel的时间 XD 08/28 18:09
5F：推 Ianthegood:元po是说running gel的中间吧? 08/28 20:19
6F：→ nymph:marker卡在那条线上 那sample也有卡住吗?? 08/29 23:12
7F：→ trp9999:sample应该也是有卡住 08/30 13:08
8F：→ trp9999:之前想说是不是marker的问题,但是我跟其他的实验室借marke 08/30 13:08
9F：→ trp9999:借marker来跑还是一样 08/30 13:09
10F：→ nymph:要不要用更高%的gel来试试看?? 你是买已经混合好的配方吗?? 08/30 20:38
11F：→ iuy:我有遇过这情形 用到14%还是会有分层现象 08/30 21:00
12F：推 datro:isopropanol没洗乾净? 上胶凝太久拔COMB拉起来? 08/30 21:35
13F：推 Fourfish:确定是胶有断开?还是只是跑到一半跑不下去?tracing dye呢 08/31 10:45
14F：→ Fourfish:若胶断开 检查一下玻璃看看.若跑不下去 检查buffer 08/31 10:48
15F：→ Fourfish:running buffer不知道你会不会reuse 会的话用新的跑看看 08/31 10:49
16F：→ trp9999:gel拿起来是没有断掉 只是好像那条线上下浓度不一样? 08/31 21:17
17F：→ trp9999:buffer是用新的 东西还是会跑下去 08/31 21:18
18F：→ trp9999:只是到那条线的时候会卡很久 08/31 21:18
19F：→ trp9999:等到30以上的marker都卡成一条线了才跑下去= =+ 08/31 21:19
20F：→ trp9999:to iuy不知道你到最後是怎麽解决的呢~ 08/31 21:22
21F：→ iuy:首先请问你要看多少kD的protein? 09/01 11:50
22F：→ iuy:我到最後还是没有完全解决 但是拿跑出我要看的东西就好 09/01 11:51
23F：→ trp9999:40~75kD之间 09/03 10:31
24F：→ trp9999:意思是说在分层之前就把要的东西分开罗? 09/03 10:34
25F：→ iuy:我的情况是让胶继续跑 那条分层就会往下移动 就可以分开 09/03 16:11