作者iwenyo2 (柚子)
看板Biotech
標題[求救] mismatch PCR
時間Fri Aug 27 00:06:54 2010
最近再P一個point mutation 的基因
以paper的primer 做PCR 都可以P出產物
如果是mutation 就會有該酵素切位 可沏出不同大小的片段
但問題是 酵素切割都切不出來 是過不同牌子相同的酵素
也無法切出 但確定該病人 是該疾病點突變
想請問:
PCR 產物 要先純化後再切割或將切割總體積放大(PCR reagent會影響酵素切割)
point mutation PCR是否要用proffreading 的Taq做PCR
因為是point mutation 所以有hetroligus的問題? 有可能P到是normal的一端
但很多篇paper都是用相同的酵素切割 該基因 都可以切出
感謝!!
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◆ From: 163.25.118.160
1F：→ biingru:請問你有 postive control 嗎？ 08/27 00:18
2F：→ iwenyo2:不算有，但我拿來做的sample是已經確診的病人了 08/27 00:26
3F：→ biingru:在實驗的嚴謹上，你應該要有postive c. 這樣才可以幫你解 08/27 01:16
4F：→ biingru:決問題 08/27 01:16
5F：推 ararthur:同意樓上 另外你說的是heterozygous嗎? 08/27 01:41