作者iwenyo2 (柚子)
看板Biotech
标题[求救] mismatch PCR
时间Fri Aug 27 00:06:54 2010
最近再P一个point mutation 的基因
以paper的primer 做PCR 都可以P出产物
如果是mutation 就会有该酵素切位 可沏出不同大小的片段
但问题是 酵素切割都切不出来 是过不同牌子相同的酵素
也无法切出 但确定该病人 是该疾病点突变
想请问:
PCR 产物 要先纯化後再切割或将切割总体积放大(PCR reagent会影响酵素切割)
point mutation PCR是否要用proffreading 的Taq做PCR
因为是point mutation 所以有hetroligus的问题? 有可能P到是normal的一端
但很多篇paper都是用相同的酵素切割 该基因 都可以切出
感谢!!
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◆ From: 163.25.118.160
1F：→ biingru:请问你有 postive control 吗？ 08/27 00:18
2F：→ iwenyo2:不算有，但我拿来做的sample是已经确诊的病人了 08/27 00:26
3F：→ biingru:在实验的严谨上，你应该要有postive c. 这样才可以帮你解 08/27 01:16
4F：→ biingru:决问题 08/27 01:16
5F：推 ararthur:同意楼上 另外你说的是heterozygous吗? 08/27 01:41