作者mzac1b (Goodday)
看板Biotech
標題[求救] 請問RT 之後測量cDNA 之量準嗎?
時間Wed Aug 25 21:02:25 2010
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
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我進行一批樣品的RT-PCR 時
會先測量RNA 之量
再取定量RNA 去跑RT
可是RT之後
去跑GAPDH 之PCR 時
常常顯示各樣品cDNA 量並不一致
於是要調整老半天以求各樣品GAPDH 之PCR 產物一樣亮
想請問的是
如果跑完RT所得之cDNA 之溶液
以photometer (測定特定吸光值) 去測單股DNA 之量來判斷cDNA 之量準嗎?
或是有沒有辦法在跑PCR 之前先確認各樣品cDNA之量一致?
先感謝指教~~
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◆ From: 210.60.122.14
1F：推 leoblack:RT-PCR不就只能當"相對"定量嘛!?得做均一化才行啊 08/25 22:38
2F：推 wangba:有做cDNA沉澱 把RNA和dNTP去除嗎? 沒有的話測不準 08/26 01:59
3F：推 icome:老問題囉 cDNA吸光測不準因為裡面有很多dNTP 08/26 16:33
4F：→ iceking:只能在RNA定量及RT過程盡量改善手法,減少後續調整麻煩 08/27 12:20
5F：推 chaunen:只能盡量減少pipette error... 08/28 00:07
6F：推 chicflower:訄搯ㄓFpipette error之外,還有哪些要注意的呢? 08/30 15:49
7F：→ chicflower:我每次都很小心,可是每次轉出來GAPDH多少都會差一點> < 08/30 15:50
8F：→ chaunen:除了RNA外, 其他東西都配成一管再分裝, 確保差異最小 08/31 03:21