作者mzac1b (Goodday)
看板Biotech
标题[求救] 请问RT 之後测量cDNA 之量准吗?
时间Wed Aug 25 21:02:25 2010
发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出
以方便板友帮您追踪问题
----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章----
我进行一批样品的RT-PCR 时
会先测量RNA 之量
再取定量RNA 去跑RT
可是RT之後
去跑GAPDH 之PCR 时
常常显示各样品cDNA 量并不一致
於是要调整老半天以求各样品GAPDH 之PCR 产物一样亮
想请问的是
如果跑完RT所得之cDNA 之溶液
以photometer (测定特定吸光值) 去测单股DNA 之量来判断cDNA 之量准吗?
或是有没有办法在跑PCR 之前先确认各样品cDNA之量一致?
先感谢指教~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.14
1F：推 leoblack:RT-PCR不就只能当"相对"定量嘛!?得做均一化才行啊 08/25 22:38
2F：推 wangba:有做cDNA沉淀 把RNA和dNTP去除吗? 没有的话测不准 08/26 01:59
3F：推 icome:老问题罗 cDNA吸光测不准因为里面有很多dNTP 08/26 16:33
4F：→ iceking:只能在RNA定量及RT过程尽量改善手法,减少後续调整麻烦 08/27 12:20
5F：推 chaunen:只能尽量减少pipette error... 08/28 00:07
6F：推 chicflower:訄搯ㄓFpipette error之外,还有哪些要注意的呢? 08/30 15:49
7F：→ chicflower:我每次都很小心,可是每次转出来GAPDH多少都会差一点> < 08/30 15:50
8F：→ chaunen:除了RNA外, 其他东西都配成一管再分装, 确保差异最小 08/31 03:21