作者iwenyo2 (柚子)
看板Biotech
標題[求救] cloning
時間Tue Aug 17 20:07:16 2010
最近利用commerial的TA cloning
將需要保存的gene 以profreading Taq PCR 後
切膠純化後 做A- tailing
以kit ligation transform 至DH5a
隔天長出colony 以colony PCR 後得到我想要的產物(~400bp)
但clony養liquid 抽plasmid run PCR 後卻發現
除了目標產物外 有一個很大的band (>3K)
想請問 那個band 雜band嗎? 為什麼colony PCR 跟plasmid DNA PCR 結果會有差異??
麻煩了
感謝!!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.160
1F：推 aceliang:很大的band是多大？RNA沒弄乾淨阿？ 08/17 21:09
2F：推 boblu:抽 plasmid 抽出雜 band 跟cloning 有無成功沒有直接關係吧 08/17 22:08
3F：→ boblu:另外你忘了說你 plasmid DNA PCR 出來的結果為何？ 08/17 22:08
4F：→ iwenyo2:plasmid DNA PCR 結果除了目標產物外還有一個很大的band 08/17 23:04
※ 編輯: iwenyo2 來自: 163.25.118.160 (08/17 23:06)
5F：→ blence:是你的plasmid;兩次PCR的template差異很大,當然不需比較 08/17 23:25
6F：推 takumatw:怎麼會有proofreading的taq???是混和酵素嗎??? 08/18 06:50
7F：推 cloneting:可能是template太濃 稀釋更高倍試試吧 08/18 08:42
8F：推 yaliu:同上~ 08/18 23:53
9F：推 mattmatt:同上 plasmid PCR只需1 ng以下的template.. 08/19 21:14
10F：→ mattmatt:高於100ng就很有機會在膠上看到plasmid本身 定個量吧~ 08/19 21:15
11F：推 icome:用RE check看看 PCR條件不對常常有怪事發生 08/20 09:49
12F：推 blueashin:變成 iPCR?? 08/22 02:22
13F：→ rimeni:是你去做PCR的template~plasmid DNA做PCR 20ng足足夠了 08/22 07:31