作者iwenyo2 (柚子)
看板Biotech
标题[求救] cloning
时间Tue Aug 17 20:07:16 2010
最近利用commerial的TA cloning
将需要保存的gene 以profreading Taq PCR 後
切胶纯化後 做A- tailing
以kit ligation transform 至DH5a
隔天长出colony 以colony PCR 後得到我想要的产物(~400bp)
但clony养liquid 抽plasmid run PCR 後却发现
除了目标产物外 有一个很大的band (>3K)
想请问 那个band 杂band吗? 为什麽colony PCR 跟plasmid DNA PCR 结果会有差异??
麻烦了
感谢!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.160
1F：推 aceliang:很大的band是多大？RNA没弄乾净阿？ 08/17 21:09
2F：推 boblu:抽 plasmid 抽出杂 band 跟cloning 有无成功没有直接关系吧 08/17 22:08
3F：→ boblu:另外你忘了说你 plasmid DNA PCR 出来的结果为何？ 08/17 22:08
4F：→ iwenyo2:plasmid DNA PCR 结果除了目标产物外还有一个很大的band 08/17 23:04
※ 编辑: iwenyo2 来自: 163.25.118.160 (08/17 23:06)
5F：→ blence:是你的plasmid;两次PCR的template差异很大,当然不需比较 08/17 23:25
6F：推 takumatw:怎麽会有proofreading的taq???是混和酵素吗??? 08/18 06:50
7F：推 cloneting:可能是template太浓 稀释更高倍试试吧 08/18 08:42
8F：推 yaliu:同上~ 08/18 23:53
9F：推 mattmatt:同上 plasmid PCR只需1 ng以下的template.. 08/19 21:14
10F：→ mattmatt:高於100ng就很有机会在胶上看到plasmid本身 定个量吧~ 08/19 21:15
11F：推 icome:用RE check看看 PCR条件不对常常有怪事发生 08/20 09:49
12F：推 blueashin:变成 iPCR?? 08/22 02:22
13F：→ rimeni:是你去做PCR的template~plasmid DNA做PCR 20ng足足够了 08/22 07:31