作者what15 (小蛙)
看板Biotech
標題[求救] 造成透析時蛋白質沉澱的原因
時間Tue Aug 17 16:25:35 2010
小妹的蛋白質為inclusion body
所以必須用8M urea回溶
再來利用Ni resin純化
收集elute出來的sample
接著用dialysis的方式將urea和imidazol稀釋
我的方式是從5M urea開始降 每次降1M
一直降到3M都OK
不過從3M往下降就會出現沉澱的現象 (sample由澄清變成混濁)
一次降0.5M也是會沉澱
不知道有哪些因素可能造成蛋白質沉澱
小妹應該從哪個層面下手 解決這個問題呢
dialysis buffer的pH值會影響嗎?
還是蛋白質dialysis的過程中本來就會有部分摺疊錯誤?
因為以前完全沒有做過透析
謝謝
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◆ From: 140.109.49.159
1F：推 McRay:不是每個蛋白都能在urea濃度遞減中refolding 08/17 19:32
2F：推 McRay:也許可以降低IPTG的濃度或是降低INDUCTION的溫度並延長時間 08/17 19:35
3F：→ McRay:一開始就儘量得到soluble form 08/17 19:35
4F：→ McRay:另外，也可以在urea濃度遞減中添加0.1M NaCl是否增加溶解度 08/17 19:37
5F：→ McRay:以上只是個人淺見 相信中研院會有更多的人提供您諮詢 08/17 19:37