作者what15 (小蛙)
看板Biotech
标题[求救] 造成透析时蛋白质沉淀的原因
时间Tue Aug 17 16:25:35 2010
小妹的蛋白质为inclusion body
所以必须用8M urea回溶
再来利用Ni resin纯化
收集elute出来的sample
接着用dialysis的方式将urea和imidazol稀释
我的方式是从5M urea开始降 每次降1M
一直降到3M都OK
不过从3M往下降就会出现沉淀的现象 (sample由澄清变成混浊)
一次降0.5M也是会沉淀
不知道有哪些因素可能造成蛋白质沉淀
小妹应该从哪个层面下手 解决这个问题呢
dialysis buffer的pH值会影响吗?
还是蛋白质dialysis的过程中本来就会有部分摺叠错误?
因为以前完全没有做过透析
谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.49.159
1F：推 McRay:不是每个蛋白都能在urea浓度递减中refolding 08/17 19:32
2F：推 McRay:也许可以降低IPTG的浓度或是降低INDUCTION的温度并延长时间 08/17 19:35
3F：→ McRay:一开始就尽量得到soluble form 08/17 19:35
4F：→ McRay:另外，也可以在urea浓度递减中添加0.1M NaCl是否增加溶解度 08/17 19:37
5F：→ McRay:以上只是个人浅见 相信中研院会有更多的人提供您谘询 08/17 19:37