作者azywu ()
看板Biotech
標題[求救] BCA與Bio-Rad protein assay kit....
時間Fri Aug 13 12:07:53 2010
各位版友你們好，小弟是個非生科相關科系的研究生，
自認為沒有深厚的分子生物背景，所以請大家多多包含。
小弟最近遇到了一個實驗上的問題，自己感覺到相當的奇怪，
實驗目標是針對某株細菌在培養的過程中監測上清液中的蛋白物質，
小弟使用了BCA protein assay kit在不同的培養時間採樣分析，
上清液都經過了0.22過濾頭過濾掉懸浮的細菌才分析，
控制組的培養基也有進行同步的蛋白物質監測，
實驗的結果顯示培養時間越長上清液中會累積蛋白物質，
而且以BCA protein assay所分析到的濃度相當的高，
不過小弟困惑的是，小弟以相同的樣品，改以Bio-Rad protein assay kit分析，
其結果竟然是上清液中完全沒有任何的蛋白質物質，
在595 nm的吸光值跟標準品的0點差不多。
雖然BCA的偵測靈敏度(0-100 ug-BSA/ml-OK)
相對的較Bio-Rad(200-900 ug/ml-OK)的方法來的高，
不過從實驗結果來看，BCA分析到的結果上清液的蛋白物質濃度應該很高，
所以應該不至於低於Bio-Rad方法的偵測極限，
這個問題真的讓小弟很苦惱，不知道該相信哪一個分析方法的結果....
不知道各位版友有沒有遇過相似的問題，或是可否給小弟一點建議或是解釋?
先感謝各位版友的協助!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.29.39
1F：推 inchew:請看說明書，也許你的菌液對該方法而言干擾物濃度過高 08/13 18:56
2F：→ inchew:說明書上會附上能容忍的各種干擾物的種類及濃度範圍~ 08/13 18:58
3F：→ inchew:還有要注意bio-rad對5kDa以下的蛋白親和力很差(會很不准)。 08/13 18:59
4F：推 inchew:上次我跟你遇過相同狀況，就是因為我的目標蛋白太小的關係 08/13 19:05
5F：→ inchew:另外確認一個基本的小問題:你有扣除掉medium only(blank)嗎 08/13 19:06
6F：→ azywu:我的菌液內並沒有說明書中指到的干擾物質，我有對照過了 08/15 01:01
7F：→ azywu:不過也許跟你所說的蛋白大小有關，我的蛋白質會通過3kDa的 08/15 01:01
8F：→ azywu:分子篩，先前有嚐試過了，所以還滿有可能是這樣的問題! 08/15 01:01
9F：→ azywu:有的 medium blank的部分已經有做過雙重確認! 08/15 01:02
10F：→ azywu:感謝inchew!!! 08/15 01:02
11F：推 inchew:不客氣 很高興能稍稍解答到你的問題^^ 08/16 18:34