作者azywu ()
看板Biotech
标题[求救] BCA与Bio-Rad protein assay kit....
时间Fri Aug 13 12:07:53 2010
各位版友你们好，小弟是个非生科相关科系的研究生，
自认为没有深厚的分子生物背景，所以请大家多多包含。
小弟最近遇到了一个实验上的问题，自己感觉到相当的奇怪，
实验目标是针对某株细菌在培养的过程中监测上清液中的蛋白物质，
小弟使用了BCA protein assay kit在不同的培养时间采样分析，
上清液都经过了0.22过滤头过滤掉悬浮的细菌才分析，
控制组的培养基也有进行同步的蛋白物质监测，
实验的结果显示培养时间越长上清液中会累积蛋白物质，
而且以BCA protein assay所分析到的浓度相当的高，
不过小弟困惑的是，小弟以相同的样品，改以Bio-Rad protein assay kit分析，
其结果竟然是上清液中完全没有任何的蛋白质物质，
在595 nm的吸光值跟标准品的0点差不多。
虽然BCA的侦测灵敏度(0-100 ug-BSA/ml-OK)
相对的较Bio-Rad(200-900 ug/ml-OK)的方法来的高，
不过从实验结果来看，BCA分析到的结果上清液的蛋白物质浓度应该很高，
所以应该不至於低於Bio-Rad方法的侦测极限，
这个问题真的让小弟很苦恼，不知道该相信哪一个分析方法的结果....
不知道各位版友有没有遇过相似的问题，或是可否给小弟一点建议或是解释?
先感谢各位版友的协助!!
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.29.39
1F：推 inchew:请看说明书，也许你的菌液对该方法而言干扰物浓度过高 08/13 18:56
2F：→ inchew:说明书上会附上能容忍的各种干扰物的种类及浓度范围~ 08/13 18:58
3F：→ inchew:还有要注意bio-rad对5kDa以下的蛋白亲和力很差(会很不准)。 08/13 18:59
4F：推 inchew:上次我跟你遇过相同状况，就是因为我的目标蛋白太小的关系 08/13 19:05
5F：→ inchew:另外确认一个基本的小问题:你有扣除掉medium only(blank)吗 08/13 19:06
6F：→ azywu:我的菌液内并没有说明书中指到的干扰物质，我有对照过了 08/15 01:01
7F：→ azywu:不过也许跟你所说的蛋白大小有关，我的蛋白质会通过3kDa的 08/15 01:01
8F：→ azywu:分子筛，先前有嚐试过了，所以还满有可能是这样的问题! 08/15 01:01
9F：→ azywu:有的 medium blank的部分已经有做过双重确认! 08/15 01:02
10F：→ azywu:感谢inchew!!! 08/15 01:02
11F：推 inchew:不客气 很高兴能稍稍解答到你的问题^^ 08/16 18:34