作者boblu (六百)
看板Biotech
標題Re: [求救] Vector only 的 control 比 vector + i …
時間Thu Aug 12 00:24:26 2010
新抽了一管 vector, 225ng/uL
打算double digest 這樣做：
vector: 11uL (~2.5ug)
Enzyme: 2uL (10U/uL) each
^^
應該是20
EcoRI buffer: 4uL
BSA: 0.4uL
Water: 20.6uL (to 40uL)
37C O/N (16hr), +CIP 1hr
（Vector 用量是以 gel extraction 後回溶 30uL, 50ng/uL 為目標
40uL 反應，enzye 加 2+2 應該是極限了？建議我用更少 vector 嗎？
我希望最後濃度至少有 20ng/uL, 所以 vector 量減半是可行的）
大家覺得這樣看起來 OK 否？
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◆ From: 131.212.202.90
※ 編輯: boblu 來自: 131.212.202.90 (08/12 02:20)
1F：→ match308:final volume最好有50uL給enzyme足夠空間反應,這樣量的RE 08/12 11:13
2F：→ match308:差不多了,vector量看個人喜好吧,CIP treat完要inactivate 08/12 11:18
這是跑膠的結果
http://picasaweb.google.com/
lh/photo/JRaJO5EkNP64qwd0kCoPXXSP9H1WAU41Bngv_P1uB7M?feat=directlink
左邊兩個 lane 是要作 gel extraction 的
marker 右邊第一個 lane 是 double digested, CIP'd, 200ng
第二個 lane 是 uncut pCS2+
圖片的對比刻意誇張 這樣看起來有算切得乾淨嗎？
（先不管一刀兩刀 至少完全沒有切到的已經偵測不能？）
※ 編輯: boblu 來自: 131.212.202.90 (08/13 03:53)
3F：推 yaliu:建議你再跑遠一點~看你為切的質體跟已切過的距離有點近 08/13 08:22
4F：→ yaliu:一不小心可能切膠時會將未切的也給切下來，雖然膠片看起來 08/13 08:23
5F：→ yaliu:很乾淨，但不一定就真的這麼乾淨 08/13 08:23
6F：→ boblu:我其實真正切的時候有又多跑了一段距離 沒把照片寄給自己:p 08/13 10:18