作者boblu (六百)
看板Biotech
标题Re: [求救] Vector only 的 control 比 vector + i …
时间Thu Aug 12 00:24:26 2010
新抽了一管 vector, 225ng/uL
打算double digest 这样做：
vector: 11uL (~2.5ug)
Enzyme: 2uL (10U/uL) each
^^
应该是20
EcoRI buffer: 4uL
BSA: 0.4uL
Water: 20.6uL (to 40uL)
37C O/N (16hr), +CIP 1hr
（Vector 用量是以 gel extraction 後回溶 30uL, 50ng/uL 为目标
40uL 反应，enzye 加 2+2 应该是极限了？建议我用更少 vector 吗？
我希望最後浓度至少有 20ng/uL, 所以 vector 量减半是可行的）
大家觉得这样看起来 OK 否？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 131.212.202.90
※ 编辑: boblu 来自: 131.212.202.90 (08/12 02:20)
1F：→ match308:final volume最好有50uL给enzyme足够空间反应,这样量的RE 08/12 11:13
2F：→ match308:差不多了,vector量看个人喜好吧,CIP treat完要inactivate 08/12 11:18
这是跑胶的结果
http://picasaweb.google.com/
lh/photo/JRaJO5EkNP64qwd0kCoPXXSP9H1WAU41Bngv_P1uB7M?feat=directlink
左边两个 lane 是要作 gel extraction 的
marker 右边第一个 lane 是 double digested, CIP'd, 200ng
第二个 lane 是 uncut pCS2+
图片的对比刻意夸张 这样看起来有算切得乾净吗？
（先不管一刀两刀 至少完全没有切到的已经侦测不能？）
※ 编辑: boblu 来自: 131.212.202.90 (08/13 03:53)
3F：推 yaliu:建议你再跑远一点~看你为切的质体跟已切过的距离有点近 08/13 08:22
4F：→ yaliu:一不小心可能切胶时会将未切的也给切下来，虽然胶片看起来 08/13 08:23
5F：→ yaliu:很乾净，但不一定就真的这麽乾净 08/13 08:23
6F：→ boblu:我其实真正切的时候有又多跑了一段距离 没把照片寄给自己:p 08/13 10:18