作者boblu (六百)
看板Biotech
標題Re: [求救] Vector only 的 control 比 vector + i …
時間Wed Aug 11 09:49:37 2010
我現在不是作 TA 是要接到 double digested 的 vector 裡面啊
kit 建議的用量是 vector 50ng, insert 三倍分子數啦
切 3ug, 回收 2.2ug, 回溶 40uL 剛剛好濃度啊
RE 一種放 1uL (10U) 理論上只作用一小時不是都超量超很大了嗎？
不過看板上大家都建議放更多？ 下次試試看好了
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◆ From: 71.10.75.57
1F：→ match308:我都放超量切overnight,如果你要切的兩個site很近的話 08/11 10:09
2F：→ match308:enzymes互相干擾會比較難切~ 08/11 10:10
3F：→ gryou:我都切3μg Vector 用 4μl(20U/μl)去切再用CIP 作用 08/11 11:07
4F：→ gryou:切個6小時 挑20個都得到我要的 你可以試試看 enzyme 多一點 08/11 11:09
5F：推 afunafun:你酵素反應體積多少 太少會切不好 少說體積要50ul 08/11 14:33
6F：→ afunafun:酵素的量要多加約6倍 但不超過總體積的1/10 08/11 14:34
7F：→ afunafun:酵素的量要多加約6倍 但不超過總體積的1/10 08/11 14:41
8F：推 aceliang:我想體積應該是不用那麼多啦...測試起來20ul算是不錯的。 08/11 19:43
9F：→ yaliu:我比較建議50ul，如果要純化作後續實驗...20我覺得太少耶 08/12 08:22
10F：→ boblu:我作gel extraction 的 kit 最小 elute 體積是 30uL 08/12 10:58