作者boblu (六百)
看板Biotech
标题Re: [求救] Vector only 的 control 比 vector + i …
时间Wed Aug 11 09:49:37 2010
我现在不是作 TA 是要接到 double digested 的 vector 里面啊
kit 建议的用量是 vector 50ng, insert 三倍分子数啦
切 3ug, 回收 2.2ug, 回溶 40uL 刚刚好浓度啊
RE 一种放 1uL (10U) 理论上只作用一小时不是都超量超很大了吗？
不过看板上大家都建议放更多？ 下次试试看好了
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◆ From: 71.10.75.57
1F：→ match308:我都放超量切overnight,如果你要切的两个site很近的话 08/11 10:09
2F：→ match308:enzymes互相干扰会比较难切~ 08/11 10:10
3F：→ gryou:我都切3μg Vector 用 4μl(20U/μl)去切再用CIP 作用 08/11 11:07
4F：→ gryou:切个6小时 挑20个都得到我要的 你可以试试看 enzyme 多一点 08/11 11:09
5F：推 afunafun:你酵素反应体积多少 太少会切不好 少说体积要50ul 08/11 14:33
6F：→ afunafun:酵素的量要多加约6倍 但不超过总体积的1/10 08/11 14:34
7F：→ afunafun:酵素的量要多加约6倍 但不超过总体积的1/10 08/11 14:41
8F：推 aceliang:我想体积应该是不用那麽多啦...测试起来20ul算是不错的。 08/11 19:43
9F：→ yaliu:我比较建议50ul，如果要纯化作後续实验...20我觉得太少耶 08/12 08:22
10F：→ boblu:我作gel extraction 的 kit 最小 elute 体积是 30uL 08/12 10:58