大家好，敝人做 Western blot 時 在最近觀察到自己的 beta-actin 常會黏在一起 而不是很 sharp 的分開，下文附圖 我是用老鼠大腦為組織，為了偵測 c-Fos 的表現 50 ug / ml 的濃度（低於 40 ug / ml 就偵測不到 c-Fos） 條件如下 =============================================================== Loading 前處理 || 加入 dye 後，攝氏 80 - 90 度，煮 5 分鐘 Gel || 8% SDS-PAGE Electrophoresis || Stacking gel: 80V, RT, 20 min Separation gel: 130V, RT, ~40 min Transfer || 400 mA, 冰浴, 2 hr Blocking || 5% milk in TTBS, RT, 1 hr Primary Ab || Beta-actin: 1/2500, RT, O/N c-Fos: 1/2000, RT, O/N Secondary Ab || Beta-actin: 1/5000, RT, 1 hr c-Fos: 1/3000, RT, 1 hr Wash || TTBS RT, 5 min 5 min 15 min =============================================================== c-Fos: ~ 60 kD Beta-actin: 43 kD http://tinyurl.com/2ewrxvx 這張圖是用 ECL 冷光呈色 270 秒以後得到的結果 可看到 beta actin 的邊緣有所沾連 而且不是完整的扁平形狀（近似Ｗ形鋸齒） c-Fos 形狀則比 beta actin 漂亮得多 至於 lane 2 東西很少是因為裡面有沒 sonicate 乾淨的 DNA（電泳時就可見到一坨） http://tinyurl.com/23ucpp9 這張則是 ECL 冷光呈色 250 秒以後得到的結果 beta actin 彼此有分開，但形狀仍然帶有鋸齒 想請教板上各位高手 是否能給敝人一點修改的建議 老闆想拿實驗結果投稿 不過敝人認為這樣子難看的 beta actin 恐怕不太適合當 representative figure 看到壁報上那些乾乾淨淨的 band 心裡就好癢 ~"~ 個人在猜想會不會是因為 beta actin 的一抗加太濃?? 因為先前有用過 1/5000 的，結果 beta actin 訊號不強 所以後來敝人都是用 1/2500 的濃度加一抗 --

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