大家好，敝人做 Western blot 时 在最近观察到自己的 beta-actin 常会黏在一起 而不是很 sharp 的分开，下文附图 我是用老鼠大脑为组织，为了侦测 c-Fos 的表现 50 ug / ml 的浓度（低於 40 ug / ml 就侦测不到 c-Fos） 条件如下 =============================================================== Loading 前处理 || 加入 dye 後，摄氏 80 - 90 度，煮 5 分钟 Gel || 8% SDS-PAGE Electrophoresis || Stacking gel: 80V, RT, 20 min Separation gel: 130V, RT, ~40 min Transfer || 400 mA, 冰浴, 2 hr Blocking || 5% milk in TTBS, RT, 1 hr Primary Ab || Beta-actin: 1/2500, RT, O/N c-Fos: 1/2000, RT, O/N Secondary Ab || Beta-actin: 1/5000, RT, 1 hr c-Fos: 1/3000, RT, 1 hr Wash || TTBS RT, 5 min 5 min 15 min =============================================================== c-Fos: ~ 60 kD Beta-actin: 43 kD http://tinyurl.com/2ewrxvx 这张图是用 ECL 冷光呈色 270 秒以後得到的结果 可看到 beta actin 的边缘有所沾连 而且不是完整的扁平形状（近似Ｗ形锯齿） c-Fos 形状则比 beta actin 漂亮得多 至於 lane 2 东西很少是因为里面有没 sonicate 乾净的 DNA（电泳时就可见到一坨） http://tinyurl.com/23ucpp9 这张则是 ECL 冷光呈色 250 秒以後得到的结果 beta actin 彼此有分开，但形状仍然带有锯齿 想请教板上各位高手 是否能给敝人一点修改的建议 老板想拿实验结果投稿 不过敝人认为这样子难看的 beta actin 恐怕不太适合当 representative figure 看到壁报上那些乾乾净净的 band 心里就好痒 ~"~ 个人在猜想会不会是因为 beta actin 的一抗加太浓?? 因为先前有用过 1/5000 的，结果 beta actin 讯号不强 所以後来敝人都是用 1/2500 的浓度加一抗 --

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