作者mediumturtle (中頭)
看板Biotech
標題[問題] 想問一下5'RACE意義為何?
時間Thu Jul 29 18:02:55 2010
現在只是讀書 只懂學理不太懂實驗
所以想問一下 5'RACE的意義為何呢?
以一段incomplete cDNA為primer
對mRNA進行反轉錄補足5'端
可是這樣3'端不也是殘缺嗎@.@??
示意圖
mRNA
5'────────── 3'
3'── 5'
incomplete cDNA
↓
5'────────── 3'
3'──────── 5'
" ? "
跑完之後 前面那段呢???
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.223.234.107
1F：→ singren:再跑3'RACE定序就好啦~ 07/29 18:59
抱歉再問一下
我用的是weaver的molecular biology
裡面只有提到5'RACE
想問一下如果用3'RACE是怎樣呢??
從網路上查似乎是用含有poly(T)的adapter去跑反轉錄
既然如此為何最後5'又不要了呢? @.@
我是看這裡的
http://www.tcmon.com/Article/UploadFiles_0702/200811/20081105145344588.jpg
2F：→ turtle24:把5'RACE產物跟3'RACE產物混合再PCR就得到cDNA全長了 07/29 20:17
可以混合!?
意思是說用3端和5端夾出來是嗎?
那想問一下做3'RACE的時候不是已經反轉錄整個target mRNA了嗎?
為何接下的步驟只要3端而已?
※ 編輯: mediumturtle 來自: 61.223.234.107 (07/29 20:28)
3F：推 Ianthegood:exact transcription start site 07/29 21:17
4F：→ mediumturtle:那如何獲得cDNA全長呢? 07/29 22:22
5F：→ turtle24:以前的技術沒辦法區分3'RACE有沒有全部做完吧 會缺5' 07/29 23:06
6F：→ turtle24:5'RACE會缺3'的部份 兩個產物互補起來就有全長了呀 07/29 23:07
7F：→ mediumturtle:好我知道了...thanks 07/29 23:37
8F：→ vixen:因為RT時用dT的關係, 常常是缺5'端啊, 3'比較不會缺 08/03 22:21
9F：推 ralph31567:主要目的不是就在找TIS~有沒有3'端要看就實驗需要摟 08/03 23:47